重叠延伸PCR法构建UGRP1基因启动子的点突变表达载体

doi:10.3969/j.issn.1004-616x.2007.01.003

癌变·畸变·突变 ›› 2007, Vol. 19 ›› Issue (1): 8-010.doi: 10.3969/j.issn.1004-616x.2007.01.003

重叠延伸PCR法构建UGRP1基因启动子的点突变表达载体

程　烽1，2；盛　燕2；施静艺2；陈　漪2；徐　潮2；刘　智2；梁　军2；潘春明2；朱忠勇1；宋怀东2

1.南京军区福州总医院全军医学检验中心实验科，福州，350025；2.上海交通大学附属瑞金医院　人类基因组国家重点实验室上海血液学研究所，上海，200025

收稿日期:2006-06-30 修回日期:2006-09-22 出版日期:2007-01-30 发布日期:2007-01-30

Overlap-extension PCR Based Site-directed Mutants of UGRP1 Gene Promoter

CHENG Feng1,2,SHENG Yan2， SHI Jing-yi2, CHEN yi2, XU Chao2, LIU Zhi2,LIANG Jun2, ZHU Zhong-yong1, SONG Huai-dong2

1. PLA Center for Laboratory Medicine, Fuzhou General Hospital,Nanjin Military Command, Fuzhou 350025,Fujian China;2. State Key Lab for Medical Genomics,Shanghai Institute of Hematology, Ruijin Hospital, Shanghai Jiaotong University, Shanghai 200025

Received:2006-06-30 Revised:2006-09-22 Online:2007-01-30 Published:2007-01-30

摘要/Abstract

摘要： 背景与目的：构建UGRP1基因启动子的定点突变表达载体。材料与方法：以插入UGRP1基因正常启动子的质粒pGL3-UGRP1(－112G) 为模板，用重叠延伸PCR定点诱变技术,对－112位点的碱基进行定点突变，并构建定点突变表达载体。结果： DNA测序表明，UGRP1基因启动子－112处的碱基已由G突变为A，成功实现定点诱变。结论：重叠延伸PCR定点诱变技术高效、简便。pGL3－UGRP(－112A)的成功构建，为进一步研究-112G/A多态性对该基因转录活性的影响奠定了基础。

Abstract: BACKGROUND ＆ AIM: To construct sited-directed mutants of human UGRP1 gene promoter. MATERIALS AND METHODS: Mutants were constructed by overlap extention method. The plasmid pGL3-UGRP1(-112G) was used as the template， site-directed mutagenesis was performed by overlap- extention PCR method at －112 in UGRP1 gene promoter,and the expression vector of mutant at －112 was then constructed. RESULTS: By DNA sequencing, human UGRP1 gene promoter was successfully changed from G to A at －112 bp and the expression vector with the site-directed mutants were constructed. CONCLUSION: Overlap-extension PCR method was convenient and efficient for site-directed mutagenesis. Contruction of desired mutant pGL3-UGRP1(－112A) may provide a basis for the research on regulating transcriptional activity of G/A polymorphism at －112 bp of human UGRP1 gene promoter.

Key words: human UGRP1 gene, promoter, overlap extention PCR, site-directed mutagenesis

中图分类号:

Q782

程　烽, 盛　燕, 施静艺, 陈　漪, 徐　潮, 刘　智, 梁　军, 潘春明, 朱忠勇, 宋怀东. 重叠延伸PCR法构建UGRP1基因启动子的点突变表达载体[J]. 癌变·畸变·突变, 2007, 19(1): 8-010.

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Overlap-extension PCR Based Site-directed Mutants of UGRP1 Gene Promoter

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