毛细管电泳法检测耐米托蒽醌乳腺癌细胞系全基因组甲基化水平

doi:10.3969/j.issn.1004-616x.2014.02.006

癌变·畸变·突变

毛细管电泳法检测耐米托蒽醌乳腺癌细胞系全基因组甲基化水平

邓婷婷，谢妮，黄艳华，黄海燕，李子刚，胡章立，袁建辉

1. 深圳大学生命科学学院，广东深圳 518060；2. 深圳市疾病预防控制中心，广东深圳 518055；3. 深圳大学第一附属医院深圳市第二人民医院，广东深圳 518035；4. 北京大学深圳研究生院，广东深圳 518055

收稿日期:2013-07-08 修回日期:2013-08-29 出版日期:2014-03-30 发布日期:2014-03-30
通讯作者: 邓婷婷 (1989- )，女，硕士，研究方向：肿瘤耐药机制研究。
作者简介:邓婷婷 (1989- )，女，硕士，研究方向：肿瘤耐药机制研究。
基金资助:
国家自然科学基金 (30500599)，广东省自然科学基金(915150310 2000019)，深圳市科技计划重点项目 (201201028)，深圳市科技研发资金项目 (JCYJ20120615085512920；JCYJ20120613171430 264；ZYC201006180477A)，深圳市孔雀计划 (KQTD201103)

Determination of genomic DNA methylation levels in mitoxantrone-resistant breast cancer cell lines by capillary electrophoresis

DENG Ting-ting， XIE Ni，HUANG Yan-hua，HUANG Hai-yan，LI Zi-gang，HU Zhang-li， YUAN Jian-hui

1. College of Life Sciences, Shenzhen University, Shenzhen 518060; 2. Shenzhen Center for Disease Control and Prevention, Shenzhen 518055; 3. The First Affiliated Hospital, Shenzhen University, Shenzhen 518035; 4.Shenzhen Graduate School, Peking University, Shenzhen 518055, Guangdong, China

Received:2013-07-08 Revised:2013-08-29 Online:2014-03-30 Published:2014-03-30
Contact: 邓婷婷 (1989- )，女，硕士，研究方向：肿瘤耐药机制研究。
About author:邓婷婷 (1989- )，女，硕士，研究方向：肿瘤耐药机制研究。

摘要/Abstract

摘要：

目的：建立对米托蒽醌(Mit)耐药的乳腺癌MCF-7细胞系，并探讨乳腺癌细胞产生耐药与其基因组甲基化水平之间的关系。方法：用0.005、0.010和0.020 μmol/L浓度的米托蒽醌染毒乳腺癌MCF-7细胞，建立对米托蒽醌不同耐药程度的MCF-7耐药细胞系，采用流式细胞术检测各染毒组MCF-7细胞内药物荧光强度D(755)值，确定Mit耐药细胞系的建立；提取各组细胞的DNA，利用毛细管电泳法检测野生型对照组及各染毒组细胞全基因组DNA甲基化水平。结果：野生型对照组、0.005、0.010和0.020 μmol/L米托蒽醌染毒组的D(755)值依次为16.1±0.04、14.3±0.12、13.3±0.07和9.7±0.08，与野生型对照组相比，随着药物染毒浓度的增加，MCF-7细胞内药物的D(755)值逐渐减少，其中0.020 μmol/L染毒组较对照组显著减少，差异有统计学意义 (P<0.05)，表明细胞耐药性增强；而上述各组DNA甲基化水平依次为42.25%±0.64%、37.97%±1.18%、34.27%±0.14%、31.16%±0.80%，与野生型对照组相比，各染毒组细胞基因组DNA甲基化水平逐渐降低 (P<0.05)，且各染毒组间两两比较差异均具有统计学意义 (P均<0.05)。结论：成功建立了对Mit耐药的MCF-7细胞系；确定了毛细管电泳法检测基因组DNA甲基化水平的电泳分离条件。

关键词: 毛细管电泳, DNA甲基化, MCF-7细胞, 流式细胞术

Abstract:

OBJECTIVE: To establish a mitoxantrone-resistant MCF-7 breast cancer cell line，and to explore the relationship between breast cancer cells developing drug resistance and their genomic methylation levels. METHODS：Using cells infected with 0，0.005，0.010 and 0.020 μmol/L mitoxantrone，different levels of drug resistance of MCF-7/Mit cell line was established. Flow cytometer was used to detect the accumulation of mitoxantrone in MCF-7 cells to confirm drug resistant cell lines. Then，we used capillary electrophoresis to evaluate genomic DNA methylation levels of wide type and cells with different degrees of resistance. RESULTS：Compared with the control group，with increasing mitoxantrone concentration，drug accumulation gradually decreased in MCF-7 cells. In the wild-type control group，0.005，0.010 and 0.020 μmol/L -treated groups the drug D(755) values were 16.1±0.04， 14.3± 0.12，13.3±0.07 and 9.7±0.08，respectively. The 0.02 μmol/L exposure group was significantly reduced compared with the control group，indicating that drug resistance was significantly increased (P<0.05). In the wild-type control group，0.005，0.010 and 0.020 μmol/L -treated groups，the DNA methylation levels were 42.25%± 0.64%，37.97%± 1.18%，34.27%±0.14% and 31.16%±0.80%， respectively. Compared with the control group， genomic DNA methylation levels in each group of treated cells gradually decreased (P<0.05)，with significant differences between each two groups (P<0.05). CONCLUSION：Mit drug-resistant MCF-7 cell line was successfully set up. The separation condition of capillary electrophoresis when measuring genomic DNA methylation levels was determined.

Key words: capillary electrophoresis, DNA methylation, MCF-7 cell, flow cytometer

邓婷婷，谢妮，黄艳华，黄海燕，李子刚，胡章立，袁建辉. 毛细管电泳法检测耐米托蒽醌乳腺癌细胞系全基因组甲基化水平[J]. 癌变·畸变·突变, doi: 10.3969/j.issn.1004-616x.2014.02.006.

DENG Ting-ting， XIE Ni，HUANG Yan-hua，HUANG Hai-yan，LI Zi-gang，HU Zhang-li， YUAN Jian-hui. Determination of genomic DNA methylation levels in mitoxantrone-resistant breast cancer cell lines by capillary electrophoresis[J]. Carcinogenesis, Teratogenesis & Mutagenesis, doi: 10.3969/j.issn.1004-616x.2014.02.006.

参考文献

[1] 尹剑云. DNA甲基化与乳腺癌关系的研究进展[J]. 实用癌症杂志，2010，25 (1)：91-93.

[2] 周建孟，袁建辉，姬娜娜，等. 乳腺癌组织中DNA甲基化转移酶与多药耐药基因ABCG2表达的关系[J]. 癌变·畸变·突变，2009，21 (3)：194-200.

[3] Fraga MF，Uriol E，Borjia DL，et al. High-performance capillary electrophoretic method for the quantification of 5-methyl 2′-deoxycytidine in genomic DNA：application to plant， animal and human cancer tissues[J]. Electrophoresis， 2002，23 (11)：1677-1681.

[4] Michaela W，Dirk S，Hans-Christian K，et al. Determination of the DNA methylation level in tumor cells by capillary electrophoresis and laser-induced fluorescence detection[J]. Electrophoresis，2004，25 (6)：839-845.

[5] Stach D，Oliver J，Stilgenbauer SS. Capillary electrophoretic analysis of genomic DNA methylation levels[J]. Nucleic Acids Res ，2003，31 (2)：1903-1908.

[6] 陈义．毛细管电泳技术及应用[M]．北京：化学工业出版社，2000：1.

[7] 季宇彬，高世勇，杨红丹，等. 甜菜碱对HepG2人肝癌细胞基因组范围DNA甲基化表达的影响[J]. 中草药杂志，2008， 39 (8)：1212-1215.

[8] Esteller M．DNA Methylation：Approaches，Methods and Applications[M]. USA：CRC Press，2004：123-128．

[9] Calatozzolo C，Gelati M，Ciusani E，et al. Expression of drug resistance proteins P-gp，MRP1，MRP3，MRP5 and GST-p in human glioma[J]. J Neurooncol，2005，74 (2)：113-121.

[10] Bush JA，Li G. Cancer chemoresistance：the relationship between P53 and multidrug resistance[J]. Int J Cancer，2002， 98 (3)：323-330.

[11] 蔡鑫泽，乔莹，都姝妍，等. 反相高效液相色谱法测定人乳腺癌MCF-7细胞中基因组DNA甲基化水平[J]. 中国医科大学学报，2010，39 (11)：898-901.

[1]	唐文娟, 伏琼, 程勇, 罗世成, 梁冰. 漆姑草醇提物对人急性早幼粒白血病细胞的诱导分化作用[J]. 癌变·畸变·突变, 2021, 33(1): 42-47.
[2]	田雪蕾, 封江彬, 田梅, 刘青杰. 甲基化芯片检测电离辐射诱导人外周血淋巴细胞DNA甲基化水平的变化[J]. 癌变·畸变·突变, 2019, 31(6): 434-439.
[3]	彭长凤, 谢杏, 柯跃斌. 纳米氧化石墨烯诱导人类支气管上皮细胞DNA氧化与甲基化的实验研究[J]. 癌变·畸变·突变, 2019, 31(6): 454-458,463.
[4]	吴德生, 杨飞, 袁建辉, 杨淋清, 黄海燕, 刘建军, 庄志雄. PM2.5对斑马鱼胚胎发育早期氧化应激和DNA甲基化调控相关基因表达的影响[J]. 癌变·畸变·突变, 2017, 29(5): 379-382.
[5]	黄鹏程, 周长慧, 李申宁, 常艳. 基于流式细胞术的组蛋白γ-H2AX磷酸化检测方法的建立[J]. 癌变·畸变·突变, 2017, 29(4): 284-288.
[6]	王治, 凌曦, 张国伟, 高建芳, 邹鹏, 井澈, 林哲韬, 刘晋祎, 曹佳, 敖琳. 叶酸对1,3-丁二烯诱发的小鼠DNA低甲基化和染色体损伤的影响[J]. 癌变·畸变·突变, 2017, 29(3): 189-193.
[7]	张海燕, 黎青叶, 陈燊, 陈雯, 何志妮. 环境化学污染物暴露相关基因甲基化焦磷酸测序方法的构建和应用[J]. 癌变·畸变·突变, 2017, 29(2): 81-86.
[8]	刘海龙, 高玮, 古盼, 邓燕霞, 黄新凤, 吴德生, 刘建军, 黄海燕. BaP诱导细胞恶性转化过程中DNA甲基化水平的变化[J]. 癌变·畸变·突变, 2017, 29(1): 42-45,50.
[9]	杨英杰, 刘建香, 高刚. 电离辐射对小鼠外周血单核细胞亚群的影响[J]. 癌变·畸变·突变, 2016, 28(4): 298-301.
[10]	赖怡, 陈佳红, 张航, 乐聪, 姜岩, 陈涛. 丙烯酰胺对F344大鼠肝毒性的分子机制研究[J]. 癌变·畸变·突变, 2016, 28(3): 174-178.
[11]	付莹, 赵晨, 常振战, 林华英, 孙震晓. 毛蚶抗癌蛋白对人乳腺癌细胞MCF-7的生长抑制作用[J]. 癌变·畸变·突变, 2015, 27(6): 415-420.
[12]	封杰, 刘文斌, 陈洪强, 黄永胜, 韩飞, 曹佳, 刘晋祎. 肺癌患者MPDZ基因异常甲基化的研究[J]. 癌变·畸变·突变, 2015, 27(6): 437-440.
[13]	洪丽玲, 王婷, 范宾, 周庆云, 黄永焯, 王峰. 二溴乙腈对L5178Y细胞的遗传毒性及促凋亡作用[J]. 癌变·畸变·突变, 2015, 27(6): 450-453,458.
[14]	刘瑞雪, 安秀峰, 冯莉, 李勇超, 张波. 纳豆脂肽诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的机制研究[J]. 癌变·畸变·突变, 2015, 27(6): 459-462.
[15]	赵欢, 刘文斌, 陈洪强, 韩飞, 曹佳, 刘晋祎. TMEM196基因在肺癌中的甲基化修饰与表达调控[J]. 癌变·畸变·突变, 2015, 27(5): 353-356.

毛细管电泳法检测耐米托蒽醌乳腺癌细胞系全基因组甲基化水平

Determination of genomic DNA methylation levels in mitoxantrone-resistant breast cancer cell lines by capillary electrophoresis

PDF

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价