›› 2011, Vol. 23 ›› Issue (4): 245-249.doi: 10.3969/j.issn.1004-616x.2011.04.001
• 论著 • 下一篇
吴健谊, 蒋太峰, 谢剑君*, 张 锴, 杜则澎, 许丽艳
WU Jian-yi1,JIANG Tai-feng1,#,XIE Jian-jun1,*,ZHANG Kai2,DU Ze-peng3,XU Li-yan3
摘要: 目的: 构建一系列细胞周期蛋白依赖激酶2(cyclin-dependent kinase 2,CDK2)在哺乳动物细胞的表达载体,为研究CDK2的功能和修饰提供实验材料。 方法: 从食管癌细胞中提取总RNA,逆转录PCR扩增CDK2 编码区,然后将PCR产物克隆到T载体;扩增后的CDK2片段分别亚克隆入pcDNA3、pcDNA4、pNTAP和pEGFP等4种哺乳动物表达载体;最后,将获得的表达载体PEGFP/CDK2转染小鼠成纤维细胞NIH3T3进行初步的CDK2表达分析。 结果: RT-PCR扩增获得约900 bp的目的片段,经T载体克隆和DNA序列分析,显示重组片段是人CDK2基因序列;CDK2片段分别亚克隆入上述4种载体后获得相应表达载体;运用构建的PEGFP/CDK2表达载体,在NIH3T3细胞中表达出CDK2蛋白。 结论: 成功构建了CDK2的哺乳动物细胞系列表达载体,并在NIH3T3细胞中成功表达目的蛋白。