陈 颖,李 莹,管 隽,王忠辉,贾玉玲,周 莉,孙祖越*
CHEN Ying,LI Ying,GUAN Jun,WANG Zhong-hui,JIA Yu-ling,ZHOU Li,SUN Zu-yue*
摘要:
目的: 建立Ames波动试验的标准化方法,为其应用于化合物的遗传毒性检测奠定基础。方法:应用4种已知具有遗传毒性的阳性化合物敌克松(Dexon)、叠氮钠(SA)、环磷酰胺(CP)和2-氨基芴(2-AF)进行Ames波动试验。比较2种不同的增菌方法和2种指示剂,建立Ames波动试验的方法。Dexon采用0.1、1和10 μg/mL,SA采用0.01、0.1、1 μg/mL在非活化条件下与相应的溶剂对照进行试验;CP采用10、100、1 000 μg/mL,2-AF采用0.1、1和10 μg/mL在活化条件下与相应的溶剂对照进行试验;观察记录阳性孔数,根据情况调整阳性化合物的剂量,直到经统计分析后阳性孔数与溶剂对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。确定各阳性化合物的剂量后,在相同剂量下重复试验3次,保证试验系统稳定可靠。结果:确定了Ames波动试验4种阳性化合物的剂量。在不加S9代谢活化系统的条件下,Dexon 3 μg/mL和SA 0.05 μg/mL,3块平行96孔板与溶剂对照组相比差异均有统计学意义(P<0.01),对TA100呈现出强致突变作用;在加入S9代谢活化系统的条件下,CP 100 μg/mL和2-AF 30 μg/mL,3块平行96孔板与溶剂对照组相比差异均有统计学意义(P<0.01),对TA100也呈现出强致突变作用。同时,在实验过程中改进了试验方法:包括对受试物剂量的标准化,改进了增菌培养的方法,并确定了指示剂。结论:建立了Ames波动试验方法,对已知阳性化合物测定结果的稳定性良好,并在研究中优化了实验条件。