刘海英，黄 青，董静文，李 莉*
LIU Hai-ying，HUANG Qing，DONG Jing-wen，LI Li*
摘要：
目的： 检测胚胎癌F9细胞中Oct4对miR-302启动子活性是否具有调节作用。方法：构建PGL3-P-miR-302启动子荧光素酶报告基因质粒并验证其活性，然后将0.5 μg PGL3-P-miR-302分别与0.5和1.0 μg Oct4表达质粒共转染至293T细胞中，检测过表达Oct4对miR-302启动子活性的影响；并将0.5 μg PGL3-P-miR-302和Oct4 siRNA(2.0 μg siRNA1和2.0 μg siRNA2)共转染到F9细胞中，检测Oct4 RNA干扰对miR-302启动子活性的影响，以验证Oct4对miR-302启动子是否有调控作用。结果：成功构建了PGL3-P-miR-302启动子荧光素酶报告基因质粒，并证实了PGL3-P-miR-302在F9细胞中具有启动子活性；在T293细胞中，当Oct4表达质粒为0.5 μg时miR-302启动子转录活性是对照组的2.6倍(P<0.05)，当Oct4为1.0 μg时miR-302启动子转录活性是对照组的4.3倍(P<0.05)；在F9细胞中miR-302启动子的活性在转染Oct4 siRNA后明显下降，约为 siRNA非特异性对照组的68%(P<0.05)。结论：Oct4对miR-302启动子具有正调节作用，miR-302可能是Oct4的靶基因之一。
