毛蚶蛋白抗肿瘤活性研究

doi:10.3969/j.issn.1004-616x.2014.06.003

癌变·畸变·突变

毛蚶蛋白抗肿瘤活性研究

付莹¹，冯婷^1，#，赵晨¹，田佳鑫¹，林华英²，孙震晓^1，*

北京中医药大学中药学院生物制药系，北京 100102

收稿日期:2014-06-09 修回日期:2014-10-17 出版日期:2014-11-30 发布日期:2014-11-30
通讯作者: 孙震晓，E-mail：sunzxcn@hotmail.com
作者简介:付莹(1991- )，女，北京市人，硕士研究生，研究方向：天然抗癌活性成分的分离与筛选研究。E-mail：xuexin1991@ sina.com。 #该作者对本文的贡献与第一作者等同。
基金资助:
山东省科技发展计划项目(2011YD19007)，北京中医药大学自主选题项目(2014JYBZZ-XS097)

The antitumor activity of Arca subcrenata protein

FU Ying¹，FENG Ting^1，#，ZHAO Chen¹，TIAN Jia-xin¹，LIN Hua-ying²，SUN Zhen-xiao^1，*

Department of Biopharmaceutical, College of Chinese Pharmacy, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100102

Received:2014-06-09 Revised:2014-10-17 Online:2014-11-30 Published:2014-11-30

摘要/Abstract

摘要：

目的：分离得到毛蚶蛋白活性组分并研究其体外抗肿瘤机制及对免疫细胞的作用。方法：低温水提及硫酸铵沉淀法获取毛蚶蛋白活性组分；MTT法检测50、100、200和400 μg/mL的毛蚶蛋白活性组分分别作用24、48和72 h后对人结直肠癌细胞HT-29、HCT116，人肝癌细胞HepG-2，人肺癌细胞A549的细胞毒活性；倒置相差显微镜下观察细胞活性及Giemsa染色观察毛蚶蛋白活性组分对肿瘤细胞及核形态变化的影响，流式细胞术检测毛蚶蛋白活性组分对人结直肠癌HT-29细胞周期及凋亡的影响；MTT法检测毛蚶蛋白活性组分对小鼠巨噬细胞RAW264.7生长的影响，中性红法测定其对小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬能力的影响，Griess法检测其对小鼠巨噬细胞RAW264.7分泌NO的影响。结果：毛蚶蛋白活性组分对多种人肿瘤细胞系有抑制作用，且呈作用时间与剂量依赖性；流式细胞术结合Giemsa染色发现，其主要引起HT-29细胞G2~M期阻滞，多核细胞增加，并具一定的诱导细胞凋亡作用；在50～100 μg/mL下能刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7生长，增强其吞噬能力及NO分泌活性。结论：毛蚶蛋白活性组分具有一定抗肿瘤活性，主要机制为引起肿瘤细胞G2~M期阻滞及诱导其凋亡，且具一定免疫激活作用。

关键词: 毛蚶, 蛋白质, 抗癌, 免疫激活, G2-M期阻滞, 凋亡

Abstract:

OBJECTIVE: To isolate the active component of Arca subcrenata protein，investigate the antitumor and immune activities in vitro. METHODS：The Arca subcrenata protein active component was extracted by ice water and ammonium sulfate precipitation. Cytotoxicity in human rectal concinoma HT-29 and other cell lines treated with Arca subcrenata protein active component of 50，100，200，400 μg/mL for 24，48 and 72 h. Morphology changes in living cells were examined under the inverted phase contrast microscope. Cellular and nuclear morphological changes in human tumor cells treated with the Arca subcrenata protein active component was studied by Giemsa staining. Cell cycle and apoptosis in HT-29 cells were determined by flow cytometry. The growth of mice macrophage RAW264.7 treated the Arca subcrenata protein active component was detected by MTT assay. The phagocytosis of mice macrophage RAW264.7 treated with Arca subcrenata protein active component was determined by neutral red. The NO production by RAW264.7 was detected by Griess method. RESULTS：Arca subcrenata protein active component inhibited the survival of many tumor cell lines in concentration and time-dependent manners. Arca subcrenata protein active component induced cell were cycle arrest at G2-M cycle phases and apoptosis in HT-29 cells. It also showed that multinucleated cells were increased. Under the concentration of 50-100 μg/mL，Arca subcrenata protein active component could stimulate the growth of RAW264.7 cells，enhance phagocytosis and NO production activity. CONCLUSION：Arca subcrenata protein active component demonstrated anti-tumor activities due to its immune activation and the fact that it induced cell cycle arrest at G2-M cycle phases and apoptosis.

Key words: Arca , subcrenata, protein, antitumor, immune , activation, G2-M , cell , cycle , arrest, apoptosis

付莹，冯婷，赵晨，田佳鑫，林华英，孙震晓. 毛蚶蛋白抗肿瘤活性研究[J]. 癌变·畸变·突变, doi: 10.3969/j.issn.1004-616x.2014.06.003.

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The antitumor activity of Arca subcrenata protein

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