摘要： 目的:FEN - 1 是一种结构特异性核酸酶,它识别特定的核酸分叉结构,并切除含有游离5’末端的单链核酸。FEN - 1有对DNA 复制和修复都必需的双重功能。目前有关FEN - 1 在高等动物和人类中的系统研究尚无报道。本实验采用反义核酸技术,得到FEN - 1 基因表达被阻断的哺乳动物细胞FL - FEN - 1 - ,为进一步在哺乳动物细胞水平上研究FEN - 1基因在DNA 复制和修复过程中的作用提供基础。方法:11hFEN - 1 反义表达质粒的构建　FEN - 1 表达质粒hPET - FCH经Nco Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切,得到1084bp 的hFEN - 1 片段,经Klenow 补平后两端接上Sal Ⅰ连接头,作为连接反应的外源片段。表达载体采用经改建的哺乳动物表达载体pMAMneoAmp2 ,以Sal Ⅰ酶切,并用CIP 脱磷酸化,将外源片段和载体片段以T4 连接酶连接过夜,转化感受态DH5α酶切,酶切筛选转化子,得到hFEN - 1 反义表达质粒pMAMneoAmpFNB2。21 细胞转染及筛选　细胞的转染采用改进的磷酸钙介导的细胞转染法,将MAMneoAmp2FMB2和pMAMneoAmp2质粒分别导入FL 细胞,用含400μg/ ml G418 的MEM 完全培养基筛选,分别得到FL - FEN - 和FL - M 细胞。然后在含200μg/ ml G418 的MEM完全培养基维持培养。31 细胞生长曲线的测定　将FL 、FL - M 和FL - FEN - 细胞按5 ×104/ ml 接种于24 孔培养板,培养基均含有10μmol/ L 地塞米松,另设一组FL - FEN - 细胞不加地塞米松。每组细胞每天各取3 个复孔,用细胞计数板进行计数,共计数8 天。以第2 天和第6 天为对数生长期,计算细胞倍增时间。结果: FL 、FL - M 和FL - FEN - 1 - 的生长曲线没有明显差异,其细胞倍增时间TD 分别为2. 11 天、2. 23 天和2. 23 天。而FL - FEN - 1 在10μmol/ L 地塞米松的诱导下,细胞生长速度明显下降,细胞倍增时间TD 为3. 09 天。进一步分析同时处理的FL - FEN - 1 - 细胞和经地塞米松诱导的FL -FEN - 1 - 细胞,发现经培养第5 天两者出现显著差异( P < 0. 05) ,第6 天以后,表现为极显著差异( P < 0. 01) 。结论: FL -FEN - 1 - 细胞在地塞米松的诱导下生长出现了明显的抑制,细胞倍增时间TD 为对照组的近1. 5 倍。细胞生长曲线的测定发现FL - FEN - (dex. ) 细胞的生长速度在第5 天开始下降,此后持续受到抑制,最后导致部分细胞死亡。这说明在哺乳动物细胞中FEN - 1 基因在细胞繁殖和DNA 复制的过程中起着重要作用,FEN - 1 基因的被阻断导致了细胞生长的抑制。