摘要：

目的： 构建CYP1A2基因高表达载体，转染到L02肝细胞，建立CYP1A2高表达细胞株并检测三氯乙烯对该细胞株凋亡基因和癌基因的影响。方法：根据GenBank提供的CYP1A2基因cDNA序列设计引物，PCR扩增该基因并将其克隆到慢病毒高表达载体pLVX-acGFP1-C1中，将已经构建的慢病毒载体对293FT细胞进行转染，收集病毒上清，感染正常L02肝细胞。用嘌呤霉素进行筛选得到CYP1A2高表达L02细胞株，通过荧光定量PCR和Western blot对细胞株进行鉴定。用不同剂量三氯乙烯对正常L02肝细胞和CYP1A2高表达细胞进行染毒12 h，采用PCR方法检测凋亡基因 (Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9)和癌基因 (c-fos、c-myc、K-ras、p53)mRNA表达的变化。结果：测序证明重组慢病毒高表达载体CYP1A2基因序列与GenBank提供的CYP1A2序列一致，荧光定量PCR检测显示CYP1A2高表达细胞株CYP1A2 mRNA表达比正常L02肝细胞提高317倍，Western blot结果显示CYP1A2高表达细胞株CYP1A2蛋白表达水平比正常L02肝细胞高3.41倍。三氯乙烯染毒后，CYP1A2高表达细胞中凋亡基因Bcl-2 mRNA表达水平与正常肝细胞无显著性差异(P>0.05)，而Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9 mRNA表达水平高于正常肝细胞(P<0.05或P<0.01)。CYP1A2高表达细胞中癌基因c-myc和p53 mRNA表达水平低于正常肝细胞(P<0.05或P<0.01)，而c-fos和K-ras mRNA则高于正常肝细胞(P<0.05或P<0.01)。结论：三氯乙烯对CYP1A2高表达细胞凋亡基因和癌基因表达有显著影响，提示CYP1A2是三氯乙烯在体内代谢的重要因素，与三氯乙烯毒性存在一定关系。