筛选化学诱变原的RNR3调控重组Lac Z 基因酵母细胞的建立

doi:10.3969/j.issn.1004-616x.2014.03.012

癌变·畸变·突变

筛选化学诱变原的RNR3调控重组Lac Z 基因酵母细胞的建立

王瑞鲲，葛宜枝，陆益新，吴倩倩，李湘鸣*

扬州大学医学院预防医学教研室，江苏扬州 225001

收稿日期:2013-11-25 修回日期:2014-02-24 出版日期:2014-05-30 发布日期:2014-05-30
通讯作者: 李湘鸣，Tel：0514－87970073；E-mail：lxm571009@aliyun.com
作者简介:王瑞鲲(1988- )，男，河南洛阳人，硕士，研究方向：卫生毒理学。E-mail：840264190@qq.com.
基金资助:
国家自然科学基金资助(81041111)

Development of recombinant Lac Z gene yeast cell regulated by RNR3 promoter for screening chemical mutagens

WANG Rui-kun，GE Yi-zhi，LU Yi-xin，WU Qian-qian，LI Xiang-ming*

Preventive Medicine Department, Medical College of Yangzhou University, Yangzhou 225001, Jiangsu, China

Received:2013-11-25 Revised:2014-02-24 Online:2014-05-30 Published:2014-05-30

摘要/Abstract

摘要：

目的：建立可筛选化学诱变物的RNR3调控重组Lac Z 基因酵母细胞。方法：利用降式PCR技术从酵母基因组中扩增RNR3 启动子，将其插入到pMP206/ERE酵母报告载体，构建成RNR3调控的Lac Z酵母报告载体，将该载体转入W303-1A酵母细胞，构建成RNR3调控的重组Lac Z 基因酵母细胞。用数种化学诱变原作用于该重组基因酵母细胞，观察其对RNR3的诱导表达。结果：放线菌素D、丝裂霉素C、阿非迪霉素和溴乙锭不能诱导RNR3的表达，而甲磺酸甲脂、瘤可宁、顺铂、4-硝基-N-氧化喹啉、博来霉素、福莱霉素、5-氟尿嘧啶、喜树碱和羟基脲诱变原与RNR3表达有明显的剂量效应关系。结论：该重组酵母可用于对多种化学诱变原的快速筛选。

关键词: 化学诱变原, 酵母, &beta, -半乳糖苷酶, Lac Z 基因

Abstract:

OBJECTIVE: To establish recombinant Lac Z yeast cells regulated by RNR3 in order to screen chemical mutagens. METHODS：RNR3 promoter was amplified using touch down polymerase chain reaction (PCR) from yeast genome and inserted into the yeast report vector of pMP206/ERE to construct yeast Lac Z gene report vector regulated by RNR3. This vector was transformed into the W303-1A yeast cells to construct the recombinant Lac Z gene yeast cells. These yeast cells were treated by several kinds of chemical mutagens to assess the expression of RNR3. RESULTS： Actinomycin D，mitomycin C，aphidicolin and ethidium bromide could not induce RNR3 expression. Methyl methanesulfonate，chlorambucil，cisplatin，4-nitro-N-oxidation of quinoline，bleomycin，phleomycin，5-fluorouracil，camptothecin and hydroxyurea mutagen could induce RNR3 expression in a dose-dependent manner. CONCLUSION：Recombinant yeast can be used for rapid screening of many chemical mutagens.

Key words: chemical mutagen, yeast, beta galactosidase, Lac Z gene

王瑞鲲，葛宜枝，陆益新，吴倩倩，李湘鸣*. 筛选化学诱变原的RNR3调控重组Lac Z 基因酵母细胞的建立[J]. 癌变·畸变·突变, doi: 10.3969/j.issn.1004-616x.2014.03.012.

WANG Rui-kun，GE Yi-zhi，LU Yi-xin，WU Qian-qian，LI Xiang-ming*. Development of recombinant Lac Z gene yeast cell regulated by RNR3 promoter for screening chemical mutagens[J]. Carcinogenesis, Teratogenesis & Mutagenesis, doi: 10.3969/j.issn.1004-616x.2014.03.012.

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Development of recombinant Lac Z gene yeast cell regulated by RNR3 promoter for screening chemical mutagens

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