目的:探讨维生素E琥珀酸酯(VES)处理人胃癌SGC-7901细胞过程中自噬与内质网应激的交互作用。方法:用不同剂量(0、5、10、15、20 μg/mL)VES处理人胃癌SGC-7901细胞24 h后,激光共聚焦显微镜观察细胞内自噬标志蛋白微管相关蛋白l轻链3(LC3)荧光强度和分布情况,Western blot分别检测内质网应激标志物葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、葡萄糖调节蛋白94(GRP94)和LC3、Beclin-1的表达情况;在分别加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)和氯喹(CQ)以及内质网应激抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA)预处理2 h后,以20 μg/mL VES处理人胃癌SGC-7901细胞24 h,Western blot分别检测内质网应激标志物GRP78、GRP94及自噬标志蛋白LC3、Beclin-1的变化。结果:与阴性对照组比较,随着VES剂量的增加,激光共聚焦显微镜观察到LC3在细胞内点状分布逐渐聚集和增强,GRP78和GRP94表达先降低后升高(P均<0.05),LC3和Beclin-1表达逐渐升高(P均<0.05);VES+3-MA组及VES+CQ组的GRP78和GRP94蛋白表达均高于单独VES组(P均<0.05);VES+4-PBA组的LC3和Beclin-1蛋白表达均低于单独VES组(P均<0.05)。结论:VES处理人胃癌细胞过程中自噬与内质网应激可以相互调节,具有交互作用。

目的:探讨新发现的抑癌基因SRY盒包含基因30(SOX30)在结直肠癌中的表达及甲基化变化。方法:用逆转录PCR(RT-PCR)检测结直肠癌细胞株(HCT8、HCT116和SW480)中SOX30 mRNA的表达,利用去甲基化药物5-Aza-CdR处理结直肠癌细胞株72 h后检测SOX30基因高甲基化与其表达调控的关系。应用甲基化特异性PCR(MSP)检测上述3株结直肠癌细胞株及54例结直肠肿瘤组织和10例癌旁组织SOX30基因的甲基化发生情况,通过硫化测序PCR(BSP)验证结直肠癌组织和癌旁组织SOX30基因的甲基化改变,并对甲基化情况与结直肠癌患者病理特征进行相关性分析。结果:SOX30 mRNA在上述3株结直肠癌细胞株中表达与对照组相比均较低,且均发生明显高甲基化;去甲基化药物处理上述3株细胞株后,SOX30 mRNA的表达明显得到恢复。SOX30基因在大部分结直肠癌组织中均呈现高甲基化状态,甲基化发生率为79.6%(43/54);而在相应的癌旁组织中甲基化检出率较低,仅为20%(2/10)。对结直肠癌患者中SOX30基因甲基化与其临床病理学资料进行相关性分析发现,SOX30基因高甲基化与患者的肿瘤病理分型显著相关(P=0.045),而与患者的性别、年龄、吸烟与否、TNM分期和Ducks分期无显著相关性(P均>0.05)。结论:SOX30基因在结直肠癌中发生明显高甲基化修饰改变,其基因表达水平明显下调,而且其甲基化修饰率与患者肿瘤病理分型相关,提示SOX30可能在结直肠癌的发生过程中起重要作用。

目的:探讨腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)对HeLa细胞内质网应激的影响。方法:试验分为对照组(1‰ DMSO)、内质网应激诱导组(2 μg/mL衣霉素或500 nmol/L MG132内质网应激诱导剂诱导)和内质网应激干预组[衣霉素或MG132+2 mmol/L AMPK激动剂5-氨基咪唑-4-甲酰胺-1-B-呋喃核糖苷(AICAR)干预组、衣霉素或MG132+2 mmol/L AMPK激动剂二甲双胍干预组以及衣霉素或MG132+0.5 mmol/L AMPK抑制剂Compound C干预组],以探究各处理组中AMPK活性状态对内质网应激的影响。收集对数生长期的HeLa细胞,分组诱导孵育后,用Western blot检测HeLa细胞AMPK/T-172磷酸化水平及内质网应激标志蛋白(p-elf2α、Grp78和XBP-1s)的表达,并采用细胞内钙集群检测分析(Indo-1 ratiometric Ca²⁺ analysis)检测各组HeLa细胞内Ca²⁺浓度的变化。结果:衣霉素和MG132可诱导内质网应激标志蛋白p-elf2α、Grp78和XBP-1s的表达。AMPK激动剂AICAR和二甲双胍干预可降低上述3种内质网应激标志蛋白的表达,并降低细胞胞浆内因内质网应激导致的Ca²⁺浓度升高,与对照组比较,差异均有统计学意义(P均<0.05)。AMPK抑制剂Compound C的干预对上述内质网应激标志蛋白的表达无明显影响(P均>0.05)。结论:AMPK激活能缓解HeLa细胞中的内质网应激,维持细胞内质网的功能稳态,可能对提高肿瘤细胞的应激耐受能力起到主要作用。

目的:探讨人肺癌细胞株H1299过表达亲环素A(CyPA)后对高温、紫外线和顺铂作用引起的细胞凋亡的影响。方法:采用重组慢病毒介导构建CyPA过表达H1299细胞株H1299 CyPA OE,并用Western blot方法验证CyPA过表达细胞株是否成功构建。培养H1299和H1299 CyPA OE细胞株,分别进行高温(44 ℃处理60 min)、紫外线(90 μW/cm²处理60 min)和顺铂(37.5、75和150 μg/mL作用2 h)处理后,用高内涵分析平台检测细胞的晚期凋亡。结果:H1299 CyPA OE细胞能检测到绿色荧光,且其CyPA蛋白表达较H1299细胞明显增高,表明H1299 CyPA OE细胞株构建成功。在不同顺铂浓度下,H1299 CyPA OE细胞凋亡率较H1299细胞均明显降低(P均<0.05),而在高温和紫外线作用下,H1299 CyPA OE细胞凋亡率与H1299细胞相比差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论:CyPA过表达对顺铂诱导的凋亡有抵抗作用,表明CyPA可作为潜在的联合化疗的基因靶点,有望为临床个体化治疗提供新的思路。

目的:人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽APOBEC-3F(A3F)和APOBEC-3G(A3G)可抑制HBV复制,并参与HBV基因组的超突变,其中HBcAg被认为是潜在作用位点,为此本文研究A3F和A3G与HBcAg可能存在的蛋白相互作用方式。方法:RT-PCR克隆人A3F和A3G的cDNA,并构建相应酵母双杂交表达载体pGADT7-A3F/-A3G;PCR克隆HBV ayw亚型HBcAg基因,构建其酵母双杂交表达载体pGBKT7-HBcAg。pGBKT7-HBcAg分别与pGADT7-3G和pGADT7-3F共转化AH109酵母菌,利用营养二缺平板及四缺平板培养及α-半乳糖苷酶活性测试,检测HBcAg与A3F和A3G的直接作用情况。构建含有HBcAg、人A3F和A3G基因的多种标签融合真核表达质粒,脂质体法转染HeLa细胞后进行免疫共沉淀实验(Co-IP),并通过Western blot检测免疫共沉淀产物确定HBcAg与A3F和A3G之间是否存在间接相互作用。结果:酶切及DNA测序分析表明成功克隆HBcAg、人A3F和A3G,并成功构建酵母双杂交、真核表达及亚细胞定位相关的表达质粒。通过酵母双杂交实验对α-半乳糖苷酶定性和定量检测显示,A3F和A3G与HBcAg无显著的直接相互作用。Western blot及Co-IP实验结果表明A3F和A3G与HBcAg均存在相互作用。结论:A3F和A3G蛋白与HBcAg蛋白之间确实存在相互作用,推测这种作用不是通过两个蛋白直接结合实现的。

目的:比较两种荧光波长CdSeS/ZnS-COOH合金量子点对细胞微核组效应遗传毒作用的特征。方法:采用L5178Y细胞胞质分裂阻滞微核细胞组学试验,490和540 nm两种荧光波长的合金量子点CdSeS/ZnS-COOH受试浓度均为0.062 5、0.125、0.25、0.5和0.1 mg/mL,观察其微核组效应、剂量-效应和时间-效应关系。结果:与阴性对照组相比,两种波长的CdSeS/ZnS-COOH合金量子点在0.062 5 mg/mL剂量时均可诱导微核率增加(P<0.05);两者都能诱导Ⅰ型微核、Ⅱ型微核和核芽效应,但490 nm合金量子点不能诱导核质桥效应,而540 nm合金量子点能诱导核质桥效应。490 nm合金量子点在0.062 5 mg/mL可诱导产生总微核、Ⅰ型微核和核芽,而540 nm合金量子点在此浓度仅可诱导产生Ⅰ型微核;两者均随着剂量进一步增加诱导产生其他效应;各种微核组效应有明显的剂量-效应关系(P<0.05)。490 nm量子点在9 h首先出现核质桥,540 nm量子点在9 h首先出现总微核和Ⅱ型微核数增加;随时间延长进一步出现其他效应,27 h各效应值达到峰值,此后下降。结论:两种荧光波长CdSeS/ZnS-COOH合金量子点均可诱导微核组学效应,但在相同剂量的效应谱、剂量-效应和时间-效应方面均有差异,表明两者的遗传毒作用特点有差异。

目的:胰岛素抵抗是2型糖尿病的重要特征及防治难点,其机制尚未明确。本文主要研究在高脂饮食诱发的胰岛素抵抗过程中,氧化应激水平及核-线粒体轴的分子改变及可能机制。方法:以雄性C57小鼠为实验对象,随机分为2组,对照组采用正常饮食饲喂,高脂组采用含10%猪油高脂饮食饲喂以诱导胰岛素抵抗模型。检测肝脏组织活性氧、脂质过氧化物丙二醛(MDA)及脂质累积水平,测定肝组织中P-Akt、Nrf2、核呼吸因子1(NRF-1)和线粒体转录因子A(mtTFA)的蛋白表达量。结果:与对照组相比,长期使用高脂饲料喂饲动物可导致动物糖耐量及胰岛素耐量下降,使肝组织内脂质累积水平和活性氧水平显著增加,丙二醛含量增加约30%,胰岛素信号分子P-Akt 蛋白表达下降约45%,Nrf2、NRF-1和mtTFA蛋白表达下降20%~30%。结论:在高脂饮食诱发胰岛素抵抗过程中,氧化应激与Nrf2/NRF-1/mtTFA分子通路的功能障碍可能发挥了重要作用。

目的:探讨不同还原态叶酸和胆碱对人结肠腺癌细胞DNA错配修复基因hMLH1和hMSH2转录水平的影响。方法:根据受试物在生理和离体情形下维持人基因组结构稳定的最适浓度,以含15、30、120 nmol/L的氧化型叶酸(FA)或还原型叶酸(5-MeTHF)与12 μmol/L氯化胆碱(CC)组合,以及不同浓度CC(1.5、3 μmol/L)与120 nmol/L FA组合的修饰RPMI-1640培养基,对人结肠腺癌细胞株COLO205进行20 d干预培养。以实时荧光定量PCR检测hMLH1和hMSH2 mRNA水平。结果:受试细胞株hMLH1和hMSH2 mRNA水平与FA、5-MeTHF和CC浓度呈显著负相关(P<0.01或P<0.05)。30 和120 nmol/L浓度下,5-MeTHF对上述细胞hMLH1和hMSH2转录水平的影响显著强于同等浓度的FA(P<0.01或P<0.05)。结论:FA、5-MeTHF和CC缺乏可上调结肠腺癌细胞hMLH1和hMSH2转录水平,这可能是细胞对叶酸和胆碱缺乏导致的DNA损伤和异常甲基化的应答反应。

目的:乙肝病毒(HBV)可通过血睾屏障将病毒DNA整合到男性生殖细胞的基因组中,诱发多种染色体畸变,而且还能破坏精子线粒体功能,导致精子活力受损,受精率和受精指数下降,但其机制未明。本研究主要考察乙肝病毒S蛋白(HBs)对人精子氧化应激的影响。方法:人精子与不同浓度(0、25、50、100 μg/mL)HBs共孵育3 h后,用流式细胞术检测精子内活性氧(ROS)的变化情况,应用酶标仪检测精子细胞内丙二醛(MDA)含量和总抗氧化能力(TAC)。结果:人精子与25~100 μg/mL HBs共孵育3 h后,ROS阳性精子比率、人精子细胞膜MDA水平显著高于对照组,而TAC 水平显著低于对照组(P<0.05或0.01)。MDA水平以及ROS阳性精子比率的升高与HBs呈剂量依赖关系(r0.62,r0.75;P均<0.01)。TAC水平的降低与HBs呈剂量依赖关系(r-0.89;P<0.01)。结论:HBs可诱导人精子内ROS升高、TAC降低,从而产生氧化应激,使细胞膜脂质过氧化进而影响人精子的功能。

目的:研究电子行业不同工种职业人群的DNA损伤情况,为确定健康危害预防重点提供依据。方法:选择珠三角某电子厂在职工人563名作为职业接触组,其中铅暴露组(n167),异丙醇组(n287),噪声组(n39),铅+高温组(n34),异丙醇+高温组(n36);选取就业前体检工人作为对照组(n90)。采集人体微量外周血进行彗星试验,运用倒置荧光显微镜拍摄彗星图片,并通过CASP彗星分析软件对彗星图片进行分析。结果:铅+高温组工人外周血的核DNA含量低于对照组(P<0.05),尾DNA含量、尾长和尾矩高于对照组(P<0.05);异丙醇+高温组工人外周血的核DNA含量低于对照组(P<0.05),尾DNA含量、尾长、彗星全长、尾惯量和尾矩高于对照组(P<0.05)。结论:本研究所选取的电子行业各工种工人均有明显的DNA损伤情况,尤以异丙醇+高温组工种最为严重,其次是铅+高温组工种,应引起职业病防治管理机构和厂方的特别关注。

目的:三氯乙烯(TCE)是环境中广泛存在的工业污染物,可引起小鼠肝癌,但对肾癌发生未见显著影响。本研究通过检测TCE对小鼠肝脏和肾脏细胞增殖和DNA甲基化调控相关基因表达以及对DNA甲基化的影响,探讨TCE引起小鼠肝癌的分子机制。方法:将6周龄B6C3F1雄性小鼠随机分成3组,每组4只,分别以0、500和1 000 mg/kg剂量的TCE连续灌胃5 d。以荧光定量PCR方法检测TCE染毒小鼠肝脏、肾脏中与细胞增殖以及DNA甲基化调控相关基因的mRNA表达水平,以结合重亚硫酸盐的限制性内切酶方法检测Cdkn1a启动子区和重复序列的DNA甲基化水平。结果:与对照组相比,TCE可引起小鼠肝脏中细胞增殖相关基因Cdkn1a、Jun和Mki67的mRNA水平显著升高(P均<0.05),且呈剂量反应关系。同时1 000 mg/kg TCE染毒小鼠肝脏中主要DNA甲基化调控基因Dnmt3a、Dnmt3b和Tet2的mRNA水平降低(P均<0.05),Uhrf1 mRNA的表达升高(P均<0.05)。TCE染毒还导致肝脏内Cdkn1a启动子区的DNA甲基化水平降低,但对肾脏中相关基因及DNA甲基化水平无显著影响。结论:TCE引起的细胞增殖相关基因表达升高及DNA甲基化异常可能在其促进小鼠肝癌发生中起重要作用。

目的:探讨大豆异黄酮和邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)对雌性大鼠体内雌激素的影响。方法:32只雌性SD大鼠按体质量随机分为4组,即大豆异黄酮(86 mg/kg)组、DEHP(68 mg/kg)组、大豆异黄酮(86 mg/kg)+DEHP(68 mg/kg)组和对照组(基础饲料),每组8只。受试物均混匀在大鼠饲料中,记录大鼠每周体质量及摄食量,喂养4周后处死,取各脏器称取质量。高效液相色谱法测定大鼠血清中DEHP含量,放射免疫法检测大鼠血清中雌二醇(E2)和睾酮(T)的水平。采用免疫组化检测大鼠子宫内膜ERα的表达量。结果:与对照组相比,各组雌鼠体质量增长无明显差异(P均>0.05);DEHP能明显增加雌性大鼠肝脏和脾脏系数(P<0.05); DEHP组和大豆异黄酮+DEHP组大鼠血清中DEHP的水平显著高于对照组(P<0.05),且二者联合作用组低于DEHP单独作用组(P<0.05)。各处理组对大鼠血清睾酮水平无显著影响,而大豆异黄酮+DEHP组和DEHP组大鼠血清中E2浓度低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化结果显示,大豆异黄酮、DEHP及二者联合作用组的大鼠子宫内膜ERα的表达与对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:DEHP能够显著增加雌性大鼠肝和脾的脏体比值且能显著降低血清中E2水平,大豆异黄酮可以一定程度上降低大鼠血清中DEHP的残留。

目的:研究大鼠孕期和哺乳期暴露2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)对子代发育及脑组织脂质过氧化的损伤作用。方法:Wistar大鼠于受孕后第2天开始经口灌胃染毒2,4-D(0、25、50和100 mg/kg)直至仔鼠出生后第21天,每天1次,连续42 d。期间检测仔鼠生理及早期神经行为发育指标。断乳1周后处死仔鼠检测脑组织丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)的含量及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力。结果:与对照组相比,100 mg/kg剂量组仔鼠体质量从出生后14 d开始降低,50 mg/kg剂量组仔鼠体质量从出生后21 d开始降低,差异均有统计学意义(P<0.05),而其他各生理发育指标差异均无统计学意义(P>0.05)。神经行为测试中100 mg/kg剂量组仔鼠断崖回避、空中翻正及听觉惊愕的阳性发生率均明显低于对照组(P<0.05),出现神经行为发育迟缓。50和100 mg/kg剂量组仔鼠脑组织中MDA含量升高,100 mg/kg剂量组仔鼠脑组织GSH含量及GSH-Px的活性下降,与对照组相比差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论:大鼠孕期和哺乳期暴露2,4-D致子代神经发育迟缓可能与2,4-D引起脑组织脂质过氧化损伤有关。

目的:探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)对大鼠睾丸和卵巢组织激素相关蛋白表达水平的影响。方法:将80只5周龄SD大鼠,雌雄各半,随机分为对照组(玉米油)、DEHP低剂量组(100 mg/kg)、DEHP中剂量组(500 mg/kg)、DEHP高剂量组(1 500 mg/kg),每组雌雄各10只,每周染毒5 d,每天灌胃染毒1次,连续6周。末次染毒24 h后处死动物,提取睾丸或卵巢组织蛋白,应用Western blot分别检测睾丸组织中3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)、促性腺激素释放激素受体(GnRHR)、卵泡刺激素受体(FSHR)及卵巢组织中黄体生成素受体(LHR)和GnRHR的蛋白表达水平。结果:与对照组比较,雄鼠睾丸组织在DEHP 500和1 500 mg/kg剂量时3β-HSD蛋白表达水平均显著升高(P均<0.01);GnRHR蛋白表达水平在1 500 mg/kg剂量组显著下降(P均<0.01);FSHR蛋白表达水平在500和1 500 mg/kg组显著下降(P<0.05或P<0.01)。雌鼠卵巢组织在DEHP 100 mg/kg剂量组时LHR和GnRHR蛋白表达水平与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05),在DEHP 500和1 500 mg/kg剂量组LHR表达水平比对照组下降25%~35%,GnRHR下降60%~80%(P<0.05或P<0.01)。结论:DEHP染毒可引起大鼠睾丸和卵巢组织激素相关蛋白表达水平的改变,干扰大鼠体内性激素的代谢,推测此作用与DEHP的生殖毒性存在密切关系。

目的:探讨脑信号蛋白4C(Sema4C)在喉鳞状细胞癌组织中的表达及意义。方法:采用免疫组化EnVision 二步法检测82例喉鳞状细胞癌及癌旁正常喉黏膜组织中Sema4C和微小染色体维持蛋白2(MCM2)蛋白的表达水平,用D2-40标记淋巴管,计数微淋巴管密度(LMVD),分析三者的表达水平变化与临床病理指标的关系。结果:Sema4C、MCM2蛋白在喉鳞状细胞癌组织中的阳性率分别为60%(49/82)及98%(80/82),均显著高于癌旁正常喉黏膜组织(P<0.01),LMVD在癌及癌旁喉黏膜中的差别无统计学意义(P=0.077); Sema4C、MCM2的表达水平与颈部淋巴结转移有关,与年龄及肿瘤T分级无显著相关。Sema4C、MCM2 蛋白表达水平和LMVD,两两间均呈正相关关系(P<均0.05)。结论:Sema4C的异常高表达与喉鳞状细胞癌的发生发展、转移及预后有关,提示Sema4C有可能成为判断喉鳞状细胞癌生物学行为及预后指标。

目的:探讨整合素αvβ6、JunB在口腔鳞癌组织中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组化方法检测120例口腔鳞癌及15例口腔正常黏膜组织中整合素αvβ6和JunB的表达情况,并分析两者表达与口腔鳞癌患者临床病理指标及预后的关系。结果:整合素αvβ6表达于口腔鳞癌组织的细胞质和胞膜,而JunB定位在口腔鳞癌组织和口腔正常黏膜组织的细胞核内。整合素αvβ6、JunB在口腔鳞癌组织中的表达强度显著高于口腔正常黏膜组织(P<0.01)。整合素αvβ6在口腔鳞癌组织中的表达与浸润深度(T分期)、组织分化程度、是否有淋巴结转移(N分期)密切相关(P<0.05),而JunB在口腔鳞癌组织中的表达与浸润深度、是否有淋巴结转移密切相关(P<0.05)。单因素生存分析表明,整合素αvβ6高表达患者的预后较低表达的患者差(P=0.021)。Cox回归多因素分析表明是否有淋巴结转移是影响患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论:整合素αvβ6和JunB在口腔鳞癌组织中表达增加,并与口腔鳞癌的浸润、转移密切相关;整合素αVβ6表达可作为判断口腔鳞癌患者预后判断的指标。

腺样囊性癌是否发生嗜神经侵袭(PNI)是影响患者预后和生存质量的重要因素,发生PNI将严重影响患者的5年生存率。目前腺样囊性癌发生PNI的具体机制仍未明了,不过近年来许多研究发现,雪旺细胞的标志物S100A4蛋白、神经胶质原纤维配性蛋白(GFAP)、髓鞘碱性蛋白(MBP)等在腺样囊性癌细胞多呈阳性表达,而在正常组织中无表达,因此肿瘤细胞的雪旺细胞化可能在PNI发展中具有重要意义。本文综述了多种腺样囊性癌中肿瘤细胞表达雪旺细胞标志物S100A4、GFAP、MBP及其在PNI进程中的可能机制,以期为肿瘤防治提供新的研究思路。

肝细胞生长因子受体c-Met属酪氨酸激酶受体,当HGF与c-Met结合后,会导致一系列信号途径的激活,最终引起肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移。本文就c-Met对多种恶性肿瘤的影响及c-Met引起肿瘤的作用机制进行简要综述。

铅是一种广泛存在的环境毒物,可对人和动物造成多系统的毒性损伤。在世界多个国家,铅毒性引起的健康损害依然是主要的公共卫生问题之一。铅作用于全身各系统和器官,累及中枢神经系统,影响儿童的智力发育,导致成人记忆力损伤、阿尔茨海默症样病变及其他神经退行性病变。铅从周围血液循环进入脑实质首先必须穿过血脑屏障和血脑脊液屏障。目前的研究显示,脑屏障系统是铅毒性作用的靶标,铅通过损伤脑屏障的结构功能并进入脑实质,造成一系列的神经系统毒性,现对近年来铅对脑屏障系统的毒作用及其机制作一综述。