目的:结合体质量生长函数,构建幼年大鼠毒死蜱(CPF)经口暴露生理基础毒代动力学及毒效应学(PBTK/TD)模型,并进行验证。方法:首先进行模型构建与验证,包括划分模型房室,确定所需参数;拟合大鼠体质量生长函数方程;编写微分方程和软件程序;利用动物实验数据优化参数,进行参数灵敏度分析和模型验证。然后进行动物实验,21日龄雌性SD大鼠按体质量随机分成对照组和12.5、25.0、50.0 mg/kg剂量组,一次性经口灌胃毒死蜱,在给药后1、3、6、12和24 h收集大鼠血清和大脑皮质,并测定各个时间点的血清毒死蜱(CPF)和3,5,6-三氯-2-吡啶(TCP)浓度,血清和大脑皮质乙酰胆碱酯酶(AChE)活力。结果:实验数据显示血清CPF和TCP浓度随时间先上升后下降,在3 h到达峰值,血清和皮质AChE活力随时间先下降后上升,血清AChE在6 h达最低值,皮质AChE在12 h达最低值。模型曲线与实验结果的变化趋势一致,模型的拟合预测情况较好;外推时会出现高估或低估的情况。结论:本模型结构和参数设计合理,且具备一定的外推能力,适用于个体平均水平的预测,但模型仍需要进一步改进。

目的: 利用胚胎干细胞试验模型评价矮壮素的发育毒性。方法:以DMSO为阴性对照,使用不同剂量(7.8125、15.625、31.25、62.5、125、250、500、1 000 μg/mL)的矮壮素染毒小鼠胚胎干细胞D3(ES-D3)和3T3成纤维细胞,观察矮壮素对ES-D3细胞向心肌细胞分化的影响,以及对ES-D3和3T3细胞的细胞毒性,在此基础上,根据发育毒性判别公式对矮壮素致畸性进行判定。提取ES-D3分化抑制试验中的拟胚体总RNA,进行real-time PCR,在基因水平检测矮壮素对ES-D3向各胚层分化的影响。结果:1 000 μg/mL矮壮素染毒可明显促进体外培养ES-D3、3T3细胞增殖;250 μg/mL的矮壮素作用下,观察到具有心肌细胞收缩的拟胚体数仅占接种拟胚体总数的69.4%;1 000 μg/mL矮壮素能够影响ES-D3向心肌细胞分化的基因标志物(Nkx2.5,α-MHC)的表达。结论:无法利用判别公式对矮壮素进行发育毒性评价;矮壮素在不引起3T3、ES-D3细胞毒性的水平下,影响ES-D3向心肌细胞的分化,有产生胚胎毒性的可能。

目的: 探讨EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白1(LMP1)基因变异与山东地区结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤(ENKTL)的相关性。方法:采用巢式PCR和DNA测序检测山东地区EBV阳性ENKTL组织(47例)和健康成年人咽漱液(70例)中LMP1全长序列,与EBV标准株及相关序列进行比对,绘制系统进化树,根据其特征性突变对基因变异进行分类,比较LMP1各变异类型在ENKTL和健康人群中分布的差异。结果:117例标本完成测序,共发现3种主要变异类型:China 1、China 2和Med-,其在ENKTL中的检出率分别为85.1%、8.5%和4.3%,在健康人群中的检出率分别为65.7%、5.7%和21.4%,另有1例(2.1%)ENKTL和5例(7.2%)健康人群为不同亚型的重组病毒株,LMP1亚型在2种人群中的分布差异具有统计学意义(P=0.022)。LMP1 N端XhoI 位点缺失变异即XhoI (-)和C端30 bp缺失即del-LMP1在ENKTL中的检出率(95.7%和85.1%)高于健康人群(74.3%和67.1%),差异均有统计学意义(P=0.003和P=0.029)。结论:山东地区ENKTL中LMP1以China 1亚型、XhoI (-)和del-LMP1为主,带有3种变异型的EBV毒株可能与ENKTL的发生相关。

目的: 探讨不同剂量的苯并[a]芘(B[a]P)和滴滴涕(DDT)联合暴露对小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和γ-谷胺酰转移酶(γ-GT)的影响及作用形式。方法:成年雄性昆明种小鼠50只,随机分为10组即空白对照组(正常饲养)、溶剂对照组(食用油和二甲基亚砜处理)、低和高浓度B[a]P染毒组[1.0和10 mg/(kg·d)]、低和高浓度DDT染毒组[0.6和6 mg/(kg·d)]、低浓度DDT+低浓度B[a]P染毒组、低浓度DDT+高浓度B[a]P染毒组、高浓度DDT+低浓度B[a]P染毒组、高浓度DDT+高浓度B[a]P染毒组。染毒组各受试物经腹腔注射染毒,每日注射1次,连续31 d。末次染毒24 h后通过眼球摘除取血,自动生化仪检测血清中ALT、AST、γ-GT的活性;并制作肝脏HE切片,观察肝细胞形态。采用两因素三水平析因设计的方差分析对数据进行统计分析。 结果:与对照组比较,B[a]P和DDT单独染毒时,均能诱导ALT和AST活性升高(F=41.308,P=0.000;F=20.083, P=0.000),随各自染毒剂量的增加,ALT和AST活性升高,但二者联合暴露对ALT和AST活性均不存在交互作用(分别为P=0.258,P=0.264)。B[a]P和DDT单独染毒对γ-GT活性均未产生明显影响,联合暴露也不存在交互作用(P=0.816)。HE染色观察到肝细胞膜界限模糊,发生水样变性,肝细胞中出现小空泡,呈蜂窝状,随染毒剂量增加,肝细胞质水样变性加剧,部分肝细胞质溶解,并且细胞核肿大,形状不规则。结论:在本实验条件下,B[a]P和DDT单独染毒均能诱导小鼠血清ALT和AST活性升高,不同剂量的B[a]P和DDT联合暴露对小鼠血清ALT、AST活性的作用形式主要表现为单独作用,而非交互作用。B[a]P和DDT的单独和联合暴露均未观察到对γ-GT的活性产生明显影响。

目的: 探讨食管腺癌DNA拷贝变化相关基因所涉及的功能、信号通路,蛋白-蛋白相互作用及表达相关性。方法:从3篇利用全基因组关联分析(GWAS)技术大规模分析食管腺癌临床样本的文献,收集120个食管腺癌DNA拷贝变化相关基因,进行生物信息学分析,包括基因功能富集分析,蛋白-蛋白相互作用网络的构建,表达谱聚类及表达相关性。结果:基于基因本体论的功能富集分析显示食管腺癌DNA拷贝变化相关基因最显著的功能是转录调控。信号通路富集分析富集基因数量最多的KEGG信号通路为“Pathway in cancer”。DNA拷贝变化相关基因的蛋白-蛋白相互作用网络含3 356个蛋白节点和63 474条边。该网络具有无尺度特点。利用公共的食管腺癌表达谱分析显示食管腺癌DNA拷贝变化相关基因表达谱聚类几乎能够将食管腺癌组织与正常食管组织完全区分,而且DNA拷贝变化相关基因之间在该表达谱中有显著的表达相关性。结论:本研究利用生物信息学方法,对食管腺癌DNA拷贝变化相关基因进行深入的分析,为将来实验验证这些基因在食管腺癌发生发展中的生物学功能奠定基础。

目的: 探讨KCNQ4和GJB2基因多态性与职业噪声性听力损失的相关性。方法:采用1:1配对病例对照研究,应用PCR和直接测序法,检测了103对噪声性听力损失工人与噪声暴露听力正常工人的KCNQ4 rs34287852和GJB2 rs3751385位点的基因型,分析目的SNP位点基因型与职业噪声性听力损失发生的关系。结果:KCNQ4 rs34287852位点T,G等位基因及各基因型在病例与对照组间的分布差异无统计学意义(P>0.05)。病例组GJB2 rs3751385位点C等位基因的频率明显高于对照组(P<0.05)。病例组CC突变基因型的频率也显著高于对照组(P<0.05),工人携带突变纯合CC基因型发生听力损失危险性为携带野生纯合型TT个体的2.78倍。结论:GJB2 rs3751385位点突变与噪声性听力损失存在相关性,GJB2 rs3751385 CC基因型可能是噪声性听力损失的易感基因型之一。

目的: 建立Bhas 42细胞转化试验高通量检测方法,并应用于染料木黄酮(GEN)潜在致癌性的检测中。方法:建立Bhas 42细胞转化试验方法,比较细胞灶法和H2O2法对结果判定的影响。细胞灶法试验组在第21天直接固定染色。H2O2法试验组在细胞接种后第19天采用H2O2处理,染色并测定D(450)以确定细胞转化率。计算转化率以验证两种方法的相关性。并通过细胞生长试验选择适宜的GEN浓度进行细胞转化试验,H2O2法判定转化试验结果。结果:在细胞灶法中,启动试验3-甲基胆蒽(3-MCA)组、促癌试验佛波醇酯(TPA)组的转化灶个数分别与启动、促癌试验DMSO组相比明显升高(P2O2法中,启动试验3-MCA组、促癌试验TPA组的转化灶个数、D(450)分别与启动、促癌试验DMSO组相比均明显升高(PD(450)相对于阴性组有显著差异(P结论:成功建立了Bhas 42细胞转化试验的H2O2法并实现了高通量检测,该法进一步缩短了实验周期并提高了结果的客观性,适用于非遗传毒性致癌物的体外早期筛选。GEN在促癌试验中呈阳性,但在启动试验中呈阴性,提示其可能是非遗传毒性致癌物。

目的: 分析肺癌组织中Toll样受体9(TLR9)表达与肺癌临床病理特征的关系及其对肺癌术后放疗结果的影响。方法:收集2007年3月至2011年12月经本院手术治疗的肺癌病史资料63例,采用免疫组化SP法检测癌组织中TLR9的表达,分析TLR9表达与肺癌临床病理特征的关系;通过对36例肺癌术后放疗患者进行Kaplan-Meier单因素生存分析和多因素Cox回归分析,探讨TLR9表达在肺癌术后放疗生存中的意义。结果:正常肺泡细胞内未见TLR9蛋白阳性表达,而TLR9蛋白定位于肺癌组织的肿瘤细胞质中,阳性表达率为68.3%(43/63)。且随着肿瘤直径增加,TLR9表达阳性率增加(PPPP结论:肺癌组织中TLR9表达阳性率升高,TLR9表达和淋巴结转移是肺癌术后放疗患者生存的独立危险因素,TLR9可能成为预测肺癌术后放疗生存的分子生物学指标。

目的: 探讨焦炉逸散物和汽车尾气有机提取物对人肝癌HepG2细胞的遗传毒性作用。方法:不同浓度的焦炉逸散物有机提取物(0.2、1.1、5.5、28、138和688 μg/L)和汽车尾气有机提取物(0.006、0.06、0.6、6.2、63和626.3 ng/L)染毒HepG2细胞24 h后,采用单细胞凝胶电泳实验和双微核实验分别测定细胞存活率、Olive尾矩、尾部DNA百分含量、尾长、微核率、核质桥率和核芽率。结果:焦炉逸散物和汽车尾气有机提取物染毒后,细胞Olive尾矩、尾部DNA含量和尾长均随着染毒剂量的增加而逐渐增加,与对照组相比,除0.006 ng/L汽车尾气有机提取物组的Olive尾矩外,差异均具有统计学意义(P<0.05)。焦炉逸散物有机提取物染毒后,HepG2细胞的微核率和核质桥率明显高于对照组(P<0.05),且均在5.5 μg/L时达到最高值,分别为对照组的3.6和2.5倍。核芽率随着焦炉逸散物有机提取物浓度的增加而逐渐增加,且在最高染毒浓度时为对照组的2.3倍。与对照组相比,0.6~626.3 ng/L汽车尾气有机提取物染毒后细胞的微核率和核质桥率均显著增加(P<0.01),63和626.3 ng/L汽车尾气有机提取物作用后,细胞核芽率显著增加(P<0.05)。结论:焦炉逸散物和汽车尾气有机提取物均可诱导HepG2细胞内的DNA和染色体损伤,单细胞凝胶电泳实验可作为低浓度环境复合污染物遗传毒性的快速评估方法。

目的: 采用不同组织来源的细胞系建立微核细胞组学,比较其遗传毒性生物标志物的敏感性,并研究雷公藤甲素(TPL)和甘草酸二铵(DG)对大鼠成纤维肺细胞(CHL)和犬肾小管上皮细胞系(MDCK)细胞微核率的影响。方法:首先建立方法,采用不同浓度丝裂霉素C(MMC)与CHL、L02、MDCK、Bhas42细胞作用6 h后给予细胞松弛素B(CytoB)继续培养约1.5个细胞倍增时间。收获细胞、制片、染色及镜检。计算每个剂量胞质分裂增殖指数(CBPI)、复制指数(RI)、坏死(Nec)及凋亡(Apop)细胞的千分率、双核细胞中微核(MN)、核芽(NBUD)和核质桥(NPB)出现的千分率。然后进行方法的验证,采用CHL细胞经不同浓度(1、10和100 μg/mL)DG预处理24 h后观察DG对上述细胞毒性和微核细胞组相关指标的影响。为进一步了解微核细胞组学对遗传毒性靶器官评估的效果,MDCK细胞经DG(10 μg/mL)预处理24 h后采用不同浓度(1和5 μg/mL)TPL染毒1 h,观察其对遗传毒性的影响。结果:MMC诱发的不同细胞系细胞毒性(CBPI、RI、Apop与Nec)均随MMC浓度升高呈升高趋势。各组细胞的MN、NBUD和NPB均出现不同程度的剂量相关性升高,但不同细胞系对MMC诱发的生物标志物峰值出现的敏感度不同。在验证实验中,与对照组相比,DG(10和100 μg/mL)对MMC(0.2 μg/mL)诱发的MN、NBUD和NPB升高有显著的抑制作用(P均<0.05)。TPL可诱发MDCK细胞NBUD和MN显著上升(P<0.05),且DG预处理可有效拮抗该效应(P<0.05)。结论:多细胞系胞质分裂阻滞微核细胞组学实验法可同时对多项遗传毒性指标进行评价。DG对CHL及MDCK细胞产生的染色体断裂有保护作用,在临床配伍中可发挥抗细胞DNA损伤的功效。

目的: 观察去甲斑蝥酸钠脂质微球注射液对荷人肺癌A549细胞移植瘤裸鼠模型肿瘤生长的抑制作用。方法:在BALB/c-nu裸鼠右前肢腋下接种A549细胞株建立人肺癌动物模型,移植11 d后采用均衡法随机分为5组,即去甲斑蝥酸钠脂质微球注射液高剂量组(5 mg/kg)、中剂量组(2.5 mg/kg)、低剂量组(1.25 mg/kg)以及阳性对照组(2.5 mg/kg去甲斑蝥酸钠注射液)和阴性对照组(等体积空白脂质微球注射液),每组7只裸鼠,给药体积为0.2 mL。采用尾静脉注射给药,各组动物于分组后第1、4、8、11、15、18、22天给药,共7次。于给药第7、14、24天检测并计算各组肿瘤体积(V_t)、相对体积(V_RT)、增殖率(T/C)等,给药后第24天检测并计算各组肿瘤质量和抑瘤率。结果:去甲斑蝥酸钠脂质微球注射液给药第7天后,各给药组肿瘤体积、相对体积均明显小于阴性对照组(P<0.05),并具有剂量-效应关系(r_{7 d}=0.994,r_{14 d}=0.993,r_{24 d}=0.996,P均<0.05);24 d后各剂量组动物肿瘤T/C均小于35%,其中2.5、5 mg/kg剂量组和阳性对照组T/C均小于20%;各给药组平均肿瘤质量明显低于阴性对照组(P<0.01),肿瘤生长抑制率均大于50%。结论:去甲斑蝥酸钠脂质微球注射液具有抑制人肺癌A549细胞生长,降低人肺癌A549细胞移植瘤增殖率的作用。

目的: 探讨TRPC1基因对小鼠空间学习和记忆的影响。方法:取4月龄野生S129小鼠(对照)和TRPC1基因敲除的S129小鼠(TRPC1 KO)各10只,采用Morris水迷宫检测其学习和记忆能力。小鼠进行连续5 d的空间探索训练以找到平台位置(定位航行实验),记录每组小鼠每天4个象限的潜伏期。在学习结束后的第7天进行长期记忆的检测(空间探索实验),记录小鼠第1次到达平台位置的时间(探索时间)和游泳轨迹、穿越平台次数、总路程、平均速度、目标象限活动时间百分比和目标象限活动路程百分比等体现小鼠记忆能力的参数,采用t检验比较两组实验结果的差异。结果:在维持5 d的学习阶段,野生对照小鼠和TRPC1 KO小鼠的潜伏期差异无统计学意义(P>0.05)。在长期记忆检测阶段,野生对照小鼠和TRPC1 KO小鼠的潜伏期、穿越平台的次数、平均速度、总路程、目标象限活动时间百分比和目标象限活动路程百分比的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:TRPC1基因敲除未影响4月龄小鼠的学习和记忆能力。

邻苯二甲酸酯类(PAEs)增塑剂是广泛存在于人类生活环境中的化合物之一。由于其环境内分泌干扰效应受到全球相关领域的高度关注。它经过食物链进入人体并蓄积在体内,影响人类生殖健康,对生殖、发育、激素分泌以及基因表达造成损害。目前的研究表明,PAEs可引起生殖能力受损,并对后代发育产生影响。且PAEs通过内分泌干扰效应,干扰体内相关激素的分泌与功能,其在血液和尿液中的代谢物与糖尿病的发生密切相关。因此,本文主要对PAEs的生殖毒性及其环境内分泌干扰效应的研究进展作一综述。

一碳单位代谢(OCM)是生物体一碳单位即甲基基团从供体化合物转移到受体的过程,对DNA合成和DNA甲基化至关重要。microRNAs (miRNAs)是一类约为22个核苷酸的内源非编码RNA,能够通过与靶 mRNA特异性结合而导致靶mRNA降解或抑制其蛋白的翻译。miRNAs 通过调节转录后水平来调控基因的表达并参与后续的生物学过程,在一碳单位代谢和相应生物学过程中发挥着重要作用。本文阐述了miRNAs在一碳单位代谢中的作用及其研究进展。

氧化钴(CoO)是一种重要的无机化合物,在陶瓷上色、玻璃着色与脱色和工业钴盐生产等过程中有着重要作用,常添加于医用材料中,然而其直接用于人体的安全性尚未见报道。为确定CoO是否可以作为医疗玻璃器械的着色剂,及其对人体是否有危害性,我们通过本课题组开展的实验结合国内外的研究成果,对CoO的急性毒性、长期毒性、迁移性、生殖毒性、遗传毒性、致癌性及致敏性进行毒性评价,综述CoO作为医用材料的毒理学研究进展。

肝癌是人类常见的恶性肿瘤之一,目前缺乏有效的诊断和治疗技术,死亡率居高不下。microRNA(miRNA)是一类内源性非编码的小RNA,研究显示,多种miRNA在正常组织和肝癌组织间存在表达差异,与肿瘤的发生发展密切相关。miR-21、miR-106a、miR-34等与肝癌的发生有关;miR-92、miR-20等与肝癌的分化有关;而miR-30d、miR-21与肝癌的增生、迁移和侵袭有关。肝癌进程中关键的miRNA及其作用靶点是近年来的研究热点,有望为肝癌诊断、治疗和预后提供新的途径。研究发现miR-375、miR-199a、miR-122等可作为潜在的肝癌诊断标志物应用于肝癌诊断;miR-195、miR-26a、miR-127等可应用于肝癌治疗;miR-221、miR-99b、miR-let-7g等被认为与肝癌术后的预后有关,还有一些其他分子可作为肝癌细胞侵袭、转移的调节分子并用于判断预后。本文就miRNA在肝癌的诊断、治疗、预后方面的研究作一综述。