目的：筛选肺癌患者血浆外泌体中的异常microRNA(miRNA)，以期为肺癌筛查及辅助诊断提供新的标志物和方向。方法：选择6名肺癌患者(腺癌3例、鳞癌2例，小细胞肺癌1例)和4名健康对照者血浆样本，采用差速离心法提取血浆外泌体，采用Agilent Bioanalyzer对抽提的RNA进行质量检验，对血浆外泌体miRNA进行高通量测序分析，采用TargetScan、PITA和miRNAorg数据库进行靶基因预测，应用R软件进行靶基因的KEGG和GO分析。结果：miRNA表达分析发现，与正常对照者比较，肺癌患者血浆外泌体中有142种miRNAs表达异常，其中62种miRNAs表达上调，80种miRNAs表达下调。GO分析显示，这些miRNAs的靶基因主要参与了以DNA为模板的转录、转录调控及信号转导等。KEGG分析显示，这些miRNAs的靶基因主要参与轴突导向信号通路、钙信号通路、肌动蛋白细胞骨架调节等。结论：通过对肺癌患者和健康对照者血浆外泌体miRNAs进行高通量测序，初步筛选出差异表达miRNA，经生物信息学分析，推测其对肺癌转移具有良好预测潜力，有望成为肺癌筛查和辅助诊断的候选生物标志物。

目的：研究慢病毒转染沉默乙酰肝素酶(HPA)联合那屈肝素(nadroparin)的协同抗肿瘤作用，并探讨其潜在的分子机制。方法：以肺癌A549细胞系为研究对象，探讨利用慢病毒介导沉默HPA和/或联合那屈肝素处理后对A549细胞的影响。抑制试验共设6组，分别为空白对照组（A549细胞）、阴性对照组（转染阴性对照shRNA序列）、沉默HPA组（转染HPA shRNA）、空白对照+那屈肝素组、阴性对照+那屈肝素组和shRNA+那屈肝素联合组。分别采用CCK-8检测各组细胞活力，酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞培养液中转化生长因子(TGF-β1)含量，体外侵袭实验(transwell)检测各组细胞迁移和侵袭能力的差异，Western blot检测各组细胞TGF-β信号通路中主要蛋白TGF-β1、磷酸化Smad2/3、锌指E盒结合同源框1(ZEB-1)、锌指转录因子SNAIL、TWIST相关蛋白、E钙黏蛋白(E-cadherin)、N钙黏蛋白(N-cadherin)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达情况。结果：通过慢病毒转染shRNA，成功建立了HPA沉默的A549细胞株。与2个对照组相比，各组细胞经沉默HPA和/或联合那屈肝素处理后，CCK-8检测结果显示，单独抑制HPA或那屈肝素处理可轻微抑制细胞活力，而联合处理会显著抑制细胞活力(P<0.05)；单独处理后TGF-β1的表达减少(P均<0.05)，联合组TGF-β1表达减少更显著(P<0.05)；单独HPA沉默或那屈肝素均能抑制细胞迁移和侵袭能力，两者联合时效果更显著(P<0.05)。Western blot同样证实了HPA沉默或那屈肝素均可不同程度诱导TGF-β1、p-Smad2/3、ZEB-1、TWIST、SNAIL、N-cadherin和MMP-2表达下调(P均<0.05)，E-cadherin表达上调(P<0.05)，且联合处理组效果更显著(P<0.05)。结论：沉默HPA联合那屈肝素可显著抑制肺癌细胞侵袭和迁移，并上调E-cadherin表达。此过程可能与TGF-β1介导上皮细胞转化过程中关键转录因子ZEB-1、TWIST和SNAIL的抑制有关。

目的：应用生物信息学技术分析和筛选影响宫颈癌(CC)预后的关键基因并探讨极光激酶A(AURKA)在宫颈鳞状细胞癌(CSCC)中的表达及其临床意义。方法：从基因表达综合(GEO)数据库下载并分析CC患者的mRNA表达谱及临床数据，利用生物信息学技术筛选出CC组织与正常宫颈组织间的差异表达基因(DEGs)。PPI网络和生存分析结果显示AURKA基因的表达和CC分期及患者预后相关。利用GEPIA2、HPA数据库分别验证AURKA mRNA及蛋白在正常宫颈组织和不同病理分期CC组织中的表达情况。采用Kaplan-Meier法分析CC患者的AURKA基因高、低表达(以中位数为截断值)与生存期是否相关。随后进一步通过实时荧光定量PCR(qPCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)技术分别检测在CSCC、宫颈上皮内瘤变(CIN)和女性健康体检者血清中AURKA mRNA及蛋白的表达。结果：GEPIA2数据库分析结果显示AURKA mRNA在CC组织中高表达(P<0.05)，且AURKA mRNA在CC不同阶段的表达水平存在显著差异(P<0.05)，随着肿瘤分期的进展AURKA mRNA的表达升高。HPA数据库分析结果显示，与正常宫颈组织相比，AURKA蛋白表达水平在CC组织中亦升高，差异具有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示，AURKA基因高表达的CC患者生存时间更短。qPCR和ELISA实验显示，CSCC和CIN患者血清AURKA mRNA的相对表达水平明显高于健康体检者(P<0.05)。CSCC患者血清AURKA蛋白的表达水平明显高于CIN及健康体检者(P<0.05)。AURKA mRNA及蛋白在CC血清中均高表达。ROC曲线及χ²检验分析结果显示AURKA mRNA的诊断价值较高，血清AURKA mRNA高表达组患者FIGO分期、淋巴结转移、肿瘤体积及肌层浸润深度均分别高于AURKA mRNA低表达组(P<0.05)。结论：CSCC患者血清中AURKA mRNA及蛋白的表达水平升高，两者联合检测对CSCC的诊断及预后监测具有潜在应用价值。

目的：检测哈萨克族食管鳞癌患者的癌组织及其癌旁正常组织人型半胱氨酸蛋白酶抑制剂cystatin 6(cystatin M/E，CST6)的蛋白表达水平，并分析其与临床病理指标和预后之间的关系。方法：收集2010年12月—2020年12月行食管癌根治术的55例哈萨克族食管鳞癌患者癌组织及癌旁正常组织标本，采用免疫组织化学染色法检测其CST6蛋白的表达情况。χ²检验分析CST6蛋白表达和患者临床病理指标之间的关系，Kaplan-Meier单因素和COX多因素分析影响食管癌预后的危险因素。结果：CST6蛋白的表达主要定位于细胞质、细胞膜以及角化区。食管鳞癌组织中CST6蛋白的阳性表达率为36.4%(20/55)，癌旁正常组织中的阳性表达率为63.6%(35/55)，差异具有统计学意义(χ²=9.032，P=0.003)。CST6蛋白的表达水平与家族史(P=0.045)和肿瘤分化程度(P=0.036)有关，无肿瘤家族史以及肿瘤高分化的患者其阳性表达率更高。Kaplan-Meier生存分析发现，CST6蛋白的表达水平与患者的总生存率有关(P<0.05)。结论：CST6蛋白在哈萨克族食管鳞癌患者中呈低表达，CST6的低表达可能是哈萨克族食管鳞癌发病及不良预后的危险因素之一。

目的：研究PTEN C末端对鼻咽癌细胞迁移及增殖能力的影响。方法：采用荧光定量PCR实验检测PTEN mRNA在鼻咽癌细胞株HONE1、SUNE1、CNE1、CNE2、5-8F和鼻咽上皮细胞NP69中的表达情况。选择5-8F和HONE1细胞，用含有TGF-β1(5ng/mL)的RPMI 1640培养基进行细胞培养，分别瞬时转染阴性对照(NC)、PTEN WT(野生型)和缺乏C末端结构的PTEN 1-353(突变体)质粒，并采用Western blot实验验证转染效率。转染成功后48h，分别采用Transwell实验、CCK-8法细胞增殖实验检测PTEN WT和PTEN 1-353对鼻咽癌细胞株5-8F和HONE1细胞迁移、增殖的影响。结果：与NP69细胞相比，PTEN mRNA在鼻咽癌细胞中的表达水平明显降低(P<0.01)。与转染NC组比较，PTEN WT和PTEN 1-353均可以抑制TGF-β1诱导的鼻咽癌细胞的迁移(P<0.01)，但此二组之间差异无统计学意义(P>0.05)；PTEN WT和PTEN 1-353均可抑制TGF-β1诱导的鼻咽癌细胞增殖(P<0.05)，且相比于PTEN WT，PTEN 1-353对鼻咽癌细胞增殖的抑制能力降低(P<0.01)。结论：PTEN C末端未参与鼻咽癌细胞的迁移过程，但可能与鼻咽癌细胞的增殖有关。

目的：研究大细胞肺癌(LCLC)Lu65和Lu99细胞株裸鼠移植瘤组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)、Ki67以及血清蛋白Albumin、IgG1、IgM的表达，及其与功能性血管数目的关系。方法：将大细胞肺癌Lu65和Lu99细胞注射至裸鼠背部皮下建立异种移植模型，利用活体冷冻技术(IVCT)制备标本，免疫组织化学法分析移植瘤侵袭组织中HIF-1α、VEGF、Ki67和血清蛋白(Albumin、IgG1、IgM)的表达，根据血管周围细胞外基质内IgM蛋白的表达情况区分功能性血管和非功能性血管并分别计数，采用t检验、[χ²]检验及Spearman秩相关分析进行统计学分析。结果：Lu65移植瘤中可见少数肿瘤细胞核中有HIF-1α蛋白表达，Lu99移植瘤细胞核中未见HIF-1α蛋白表达，二者差异有统计学意义(P<0.05)；两种移植瘤组织中VEGF和Ki67蛋白均呈高表达。HIF-1α蛋白表达水平与VEGF和Ki67蛋白无明显相关(P>0.05)。Lu65和Lu99移植瘤组织内功能性血管数目高于非功能性血管(P<0.05)。结论：Lu65和Lu99移植瘤组织中HIF-1α蛋白表达水平与VEGF、Ki67蛋白无明显相关，与细胞异质性有关。IVCT技术制备的组织标本可区分功能性血管与非功能性血管，Lu65和Lu99移植瘤组织中功能性血管数目高于非功能性血管，血清蛋白能否透过血管壁可能与其相对分子质量和血管结构有关。

目的：探讨siRNA药物的体内药代动力学评价方法，并分析脂质体作为药物载体的优势。方法：采用前期已构建的siRNA表达质粒及装载了该质粒的纳米隐形阳离子脂质体，将实验分为裸siRNA质粒组和siRNA质粒脂质体组，分别进行DNaseⅠ酶切和血清中稳定性的检测。再将20 μg siRNA裸质粒及siRNA质粒脂质体通过尾静脉注射进入小鼠体内，分别在注射后0min、5min、15min、30min、1h、2h、4h、12h、24h取血，采用实时荧光定量PCR方法(qPCR)对小鼠体内裸质粒及质粒脂质体进行定量检测，计算各时间点siRNA质粒的浓度。结果：裸质粒在DNaseⅠ中仅20min就全部降解，质粒脂质体降解较缓慢，到24h仍有(20.16±2.47)%的DNA残留；裸质粒在80%血清中20min时仅残留(11.03±0.92)%，在1h时基本全部降解，质粒脂质体在80%血清中24h时仍残留(10.26±1.04)%，与裸质粒组相比，脂质体作为载体使siRNA表达质粒在DNaseⅠ及血清中的稳定性显著提高(P<0.05)。在小鼠体内脂质体包裹的质粒半衰期约为2h，而裸质粒仅为6min，差异具有统计学意义(P<0.05)。结论：利用qPCR方法可以完成siRNA脂质体的体内检测。阳离子脂质体能够保护核酸类药物进入体内，是一种高效的递送载体，同时脂质体能够提高药物的体内稳定性，延长药物的作用时间。

目的：探究脱水淫羊藿素(DICT)对人尿源性干细胞(hUSCs)干性的影响。方法：常温离心法体外分离培养hUSCs，倒置相差显微镜下进行hUSCs形态学观察；根据MTT实验绘制hUSCs接种后1~7d的生长曲线；流式细胞术检测hUSCs表面标志物；分别设hUSCs培养基对照组，浓度为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0μmol/L的DICT处理组，利用四甲基噻唑蓝(MTT)实验检测作用1~7d后各组的细胞活力；采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测2.0μmol/L DICT作用hUSCs 3d后，对干性基因OCT-4、C-MYC mRNA表达的影响。结果：通过常温离心法成功获得形态良好、生长活性较高的hUSCs，hUSCs表达间充质干细胞表面标志物CD44和CD90，不表达造血干细胞表面标志物CD34和内皮细胞表面标志物CD31。2.0μmol/L DICT作用3~6d能显著促进hUSCs的增殖，增强其生长活力(P<0.01)，上调hUSCs干性基因OCT-4、C-MYC的mRNA表达(P<0.01)。结论：DICT在体外可增强hUSCs的干性。

目的：探讨甘油经肌肉注射对不同性别大鼠急性肾脏损伤的影响。方法：将24只健康成年SPF级SD大鼠(雌雄各半)按性别随机分为4组，雄性对照组、雄性试验组、雌性对照组与雌性试验组，每组6只。试验前禁水24h，按照10mL/kg的剂量分别给予大鼠两侧后肢肌肉注射生理盐水或50%甘油生理盐水，用代谢笼采集24h尿液；并在注射48h后麻醉通过腹主动脉采集血液，手术摘取肾、肝、脾等脏器，检查血清生化、血常规、尿常规及血凝等指标，观察肾、肝、脾等脏器的病理学变化。结果：与对照组比较，试验组大鼠血液中白蛋白(ALB)、红细胞(RBC)均出现明显降低(P<0.05)，而肌酐、尿素氮、谷丙转氨酶、血小板均明显升高(P<0.05)；雌性试验组大鼠的总蛋白及尿比重均明显降低，而门冬氨酸氨基转移酶出现明显升高(P<0.05)；病理结果显示试验组动物肾小管扩张，可见透明管型与蛋白管型，肝血窦发生扩张，其中肾损伤最明显。结论：肌肉注射甘油不仅造成肾脏损伤，而且还造成轻微的肝脏损伤。在甘油诱导的急性肾损伤模型中，雄性大鼠的肾损伤程度低于雌性大鼠。

目的：评价人参培养须根的致畸性。方法：将80只雌性和40只雄性SD大鼠，以雌雄2∶1比例合笼。将检出的受孕大鼠按体质量随机分为低、中、高剂量组(分别为2、4、8g/kg，相当于人体推荐量的60.5、121、242倍)和对照组，每组16只。于受孕6~15d连续给予受试物，并在第20天处死。剖腹取出子宫称取质量，检查着床数、吸收胎、早死胎、晚死胎及活胎数有无异常，测量胎鼠身长并称取胎仔体质量；对部分胎仔进行外观检查、骨骼检查及内脏检查。结果：与对照组相比，人参培养须根各剂量组孕鼠体质量增量、子宫质量、窝平均活胎数、胎鼠身长、体质量的差异均无统计学意义(P>0.05)；对胎鼠进行外观、脏器及骨骼检查，各剂量组和阴性对照组均未见明显异常和畸形。结论：在本实验室条件下，人参培养须根无致畸作用。

目的：研究板栗壳提取物对SD大鼠的致畸毒性。方法：将受孕SD大鼠随机分为低、中、高3个剂量板栗壳提取物组，阴性对照组和阳性对照组，每组18~20只。低、中、高剂量组分别按0.37、1.11和3.33g/kg给予板栗壳提取物；阴性对照组给予蒸馏水；阳性对照组按13mg/kg给予维生素A。于妊娠期的第6～15天灌胃给予受试物或对照物，第20天麻醉后处死孕鼠。观察母鼠和胎鼠的生长发育、受孕率、生殖能力、外观、内脏和骨骼畸形等指标。结果：与阴性对照组比较，阳性对照组第9天至第20天孕鼠体质量偏低，体质量增量降低，胎鼠体质量减轻、身长明显降低，其胎鼠外观畸形率、外观畸形窝数率、内脏畸形率、内脏畸形窝数率、骨骼畸形率、畸形窝数率明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)，表明阳性对照维生素A对大鼠致畸作用明显，模型成功建立。与阴性对照组比较，板栗壳提取物各剂量未观察到对母鼠及胎鼠的毒性和生殖力的影响，未观察到外观、内脏和骨骼畸形，差异均无统计学差异(P>0.05)。结论：在本试验条件下，板栗壳提取物对大鼠母体毒性和胚胎发育毒性未观察到有害作用剂量(NOAEL)大于3.33g/kg，对大鼠无致畸作用。

目的：对谷胱甘肽维生素C(Vit.C)片进行大鼠30天喂养试验的安全性评价。方法：将谷胱甘肽Vit.C片以417、834、1667mg/kg(相当于人体推荐剂量的25、50、100倍)的剂量连续饲喂大鼠30天。期间每天观察动物的一般表现，每周记录大鼠体质量、进食量；30天后进行大鼠血清生化和血液学指标检测，取肝、脾、肾、胃、睾丸等主要脏器称量后计算脏器系数，并且进行组织病理学检查。结果：试验期间大鼠一般情况良好，与对照组比较，试验组大鼠体质量无明显变化(P>0.05)；血液学及血生化指标结果均在正常值范围(P>0.05)；各脏器系数变化不明显，差异均无统计学意义(P>0.05)；高剂量组各器官未检出明显的病理学改变。结论：在本试验条件下，谷胱甘肽Vit.C片对大鼠未造成明显的不良影响。

癌症是危害人类健康的重大疾病，但传统的癌症治疗方法存在一定局限性。近年来，依靠激活人体免疫系统发挥抗肿瘤作用的免疫疗法逐渐兴起。但是，肿瘤免疫治疗的手段依然存在许多缺陷，常引起脱靶效应、变态反应、细胞因子风暴等免疫相关不良反应。为了克服这些缺点，实现对免疫治疗的有效控制，由光激活的纳米材料即通过光控来实现抗肿瘤免疫的手段引起了广泛关注。光控纳米材料能够实现在肿瘤部位选择性的激活抗肿瘤免疫作用，因此可有效降低免疫治疗的系统毒性。本文总结了目前常见的光激活纳米材料，包括上转换纳米颗粒(UCNPs)、金纳米颗粒(AuBPs)、碳纳米管、介孔二氧化硅纳米颗粒(MSN)和金属有机框架(MOFs)等，并论述了它们在抗肿瘤免疫治疗中的设计思路及研究现状。

DNA的精确复制对维持基因组稳定性具有重要作用，而DNA双链断裂(DSB)损伤可能诱导细胞凋亡和染色质重排，在肿瘤的发生发展过程中发挥作用。DNA依赖性蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)是磷脂酰肌醇3-激酶样蛋白激酶(PIKK)家族中相对分子质量最大及表达量最高的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。与Ku70/80结合后，DNA-PKcs在离子辐射诱导DSB后的非同源末端连接(NHEJ)有效修复过程中，发挥非常重要的作用。DNA-PKcs或其他NHEJ修复因子的缺失会导致辐射敏感性和DSB的未修复，以及V(D)J重组缺陷和免疫缺陷。本文主要对DNA-PKcs的结构，在DSB位点的募集与激活，在NHEJ修复中的作用过程及其与疾病的关系进行总结与展望，希望能为DNA-PKcs的深入研究及临床应用提供理论基础。

调节性T细胞(Tregs)是以Foxp3为标志物的CD4⁺T细胞的一个亚群，它的存在是把双刃剑，一方面起着维持机体自身免疫耐受，避免免疫应答过度而损伤机体的重要作用，另一方面该细胞可促进肿瘤细胞逃避机体免疫监视和慢性感染。Tregs引起的肿瘤细胞免疫逃逸是肿瘤免疫治疗的主要障碍之一。Tregs存在有助于肿瘤的早期建立和进展，而Tregs缺失则会导致肿瘤进展延迟。因此，针对Tregs的免疫疗法在肿瘤临床治疗方面具有广泛的应用前景，本文将对Tregs在抗肿瘤免疫和治疗中的研究进展进行综述，旨在为肿瘤治疗提供新的靶点参考。