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为了构建针对小鼠糖皮质激素受体基因第2 外显子的可诱导目标载体,我们对小鼠糖皮质激素受体基因第2 外显子及其侧翼区域的基因组DNA 片段进行了结构分析,和部分片段的亚克隆,然后以pF1ox 质粒为框架构建了可诱导的目标载体。这一载体的构建为进一步建立诱导型GR 基因剔除小鼠奠定了基础,而且对于深入研究GR 基因的表达调控也很有帮助。

人精子与去透明带金黄地鼠卵受精,在受精后异合卵培养阶段,用终浓度分别为20μg/ ml、40μg/ ml、60μg/ ml 的间接诱变剂环磷酰胺进行处理,继而制备精子染色体进行核型分析。得到环磷酰胺诱发的染色体畸变精子率在上述剂量组依次为33 %、50 %、33 %;断裂均数依次为0. 54 、1. 94 和0172 。与空白对照组比较,差异具有显著性( P < 0. 05 , P < 0101) 。本研究结果表明,用人精子/ 金黄地鼠异合卵为靶细胞,能够检出间接诱变剂的诱变性。异合卵内源性代谢活化体系的发现和应用在哺乳动物配子的毒理遗传研究中具有重要意义。

本文对等位基因特异性PCR(Allele-specific , AS2) 和多重差别(Multiplex differential , MD2) PCR 技术进行了优化,并用此法联合检测了105 例江苏地区健康人群及68 例肺癌患者CYP1A1、GSTM1 的等位基因型。结果表明:AS2PCR 及MD-PCR采用的设立双参照扩增体系,可一次同时检测CYP1A1 和GSTM1 的等位基因型。在肺癌患者组中,CYP1A1 的突变型Val/Val 的频率12/ 68 (17. 6 %) 约为健康组9/ 105 (8. 57 %) 的2105 倍,而GSTM1 纯合缺失的频率,肺癌组为39/ 68 (5713 %) ,与健康对照组42/ 105 (40 %) 相比,亦有显著增加( P < 0. 05) 。

采用细胞灶法测定结晶型硫化镍对BALB/ c - 3T3 诱发细胞转化的活性,结果表明当硫化镍浓度≥0. 25μg/ cm2 时转化率增高( P > 0. 05) ,且有剂量反应关系。各剂量组转化灶细胞共6 份经软琼脂培养试验均获阳性结果,而对照细胞则为阴性,提示硫化镍诱发的转化细胞具有锚着不依赖性,即恶性特征。

本研究以毒蕈碱型乙酰胆碱受体抑制剂阿托品在离体情况下作用于中国仓鼠V79细胞,通过分析V79细胞晚末期和早G1 期细胞核与细胞质构型、双核细胞频率,探讨了阿托品对哺乳动物离体细胞正常有丝分裂过程的影响。结果发现,阿托品使V79细胞的晚末期—早G1 期细胞核和细胞质分裂构型发生显著变化、双核细胞的频率显著提高,提示阿托品可能通过M型胆碱受体阻断过程而对哺乳动物有丝分裂真实性产生影响。胆碱受体的功能异常可能为非整倍体发生的诱因之一。

用Ames 试验和致畸试验对醋氨己酸锌进行了致突变和致畸作用研究。结果表明醋氨己酸锌在Ames 试验的TA97 、TA98 、TA100 和TA102 4 个标准菌株±S9mix条件下,1 - 5000μg/ 皿6 个剂量的标准平皿掺入试验中,未诱发各菌株阳性突变反应。小鼠致畸试验32179mg/ kg·bw、262134mg/ kg·bw 和524167mg/ kg·bw 剂量组,在母鼠妊娠期6 - 15d p. o 给药,各剂量组活胎率与溶剂对照组比较,无显著差异( P > 0105) 。对胎鼠外观、骨骼和内脏无致畸作用。但524167mg/ kg·bw 组对妊娠母鼠体重、胎鼠体重和尾长有影响,显示一定的母体和胚胎毒性。

采用体外细胞培养法观察“天宝肿宁散”方剂对小鼠成纤维细胞(3T3) 和人膀胱癌细胞( EJ ) 、人喉癌细胞(Hep - 2) 、人低分化粘液腺胃癌细胞(MGC - 803) 、人肝癌细胞(Q3) 以及人肺癌细胞(Spc - A - 1) 等肿瘤细胞的细胞存活量的影响,并以此评价该方剂对各株细胞生长的抑制作用,结果显示该方剂在体外能显著抑制肿瘤细胞生长,并呈一定剂量效应关系,而对3T3细胞未呈现出抑制作用。说明该方剂具有作为抗癌药开发利用的价值。

以外周血红细胞微核率和核异常细胞率为指标,研究了5 种物质对除草剂精克草星的诱发黄鳝遗传物质损伤的抑制作用。结果表明,维生素B2 、维生素C、β- 胡萝卜素、生姜和大蒜与精克草星共同作用时,均能显著降低精克草星诱发的微核率及核异常细胞率。说明,这5 种物质可降低除草剂精克草星对鱼类的遗传毒性,对鱼类具有保护作用。另外,还对这5 种物质抑制作用的机理进行了讨论。

系统比较了一组标准诱变剂诱导L5178Y和WTK1 细胞的微核反应,结果表明,这两种细胞微核试验方法简便灵敏,有推广价值。两种细胞对受试物的反应各有特点,如同时应用于一个短测系统,可提高筛检诱变物的准确性。

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泛素(Ubiquitin) 是一个高度保守的蛋白。泛素结合酶参与各种真核生物的代谢过程。泛素结合过程中所必需的泛素结合酶在真核生物中是高度保守的。近几年来,人们发现了一组与泛素结合酶具有较高同源性的蛋白,包括MMS2 ,CROC -1 等。但这组蛋白都不具有泛素结合酶与泛素结合的活性半胱氨酸残基,它们被命名为泛素结合酶变体蛋白(Ubiquitinconjugating E2 enzyme Variant UEV) 。有实验表明,UEV 蛋白参与真核生物的细胞分化,细胞周期调节,DNA 修复等过程,而且与肿瘤发生有关。UEV 蛋白的发现提示,泛素结合过程可能存在着一种新的调节过程。

ISG101 是近来发现的一个从酵母到人高度保守的蛋白家族。其N 端与泛素结合酶(UBC) 有一定的同源性。有研究表明: TSG101 的转录子在某些肿瘤细胞中发生了异常剪接; TSG101 可能有转录因子的作用; TSG101 也有可能作为一种显性负调节子参与泛素系统对细胞周期的调节。

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