辐射诱导染色体畸变的快速FISH方法的建立

doi:10.3969/j.issn.1004-616x.2014.02.009

癌变·畸变·突变

辐射诱导染色体畸变的快速FISH方法的建立

李爽，陆雪，赵骅，封江彬，刘青杰

中国CDC辐射防护与核应急重点实验室，中国疾病预防控制中心辐射防护与核安全医学所，北京 100088

收稿日期:2013-05-07 修回日期:2013-09-27 出版日期:2014-03-30 发布日期:2014-03-30
通讯作者: 刘青杰，E-mail：qjliu@nirp.cn
作者简介:李爽(1985- )，女，北京市人，硕士，实习研究员，研究方向：辐射生物效应。
基金资助:
国家自然科学基金资助项目(81172593)

Establishment of a rapid FISH method to analyze chromosome aberrations induced by Irradiation

LI Shuang，LU Xue，ZHAO Hua，FENG Jiang-bin，LIU Qing-jie

China CDC Key Laboratory of Radiological Protection and Nuclear Emergency，National Institute for Radiological Protection，Chinese Centre for Disease Control and Prevention，Beijing 100088，China

Received:2013-05-07 Revised:2013-09-27 Online:2014-03-30 Published:2014-03-30
Contact: 刘青杰，E-mail：qjliu@nirp.cn
About author:李爽(1985- )，女，北京市人，硕士，实习研究员，研究方向：辐射生物效应。
Supported by:
国家自然科学基金资助项目(81172593)

摘要/Abstract

摘要：

目的：建立一种检测辐射诱导染色体畸变的快速荧光原位杂交(FISH)方法。方法：两步简并引物PCR法扩增人α-卫星DNA，制备荧光基团直接标记的泛着丝粒探针；对60Coγ射线照射后的人外周血淋巴细胞染色体标本进行FISH分析，荧光显微镜下检测着丝粒及染色体形态。结果：直接标记泛着丝粒探针杂交后显示所有染色体着丝粒均有较强的信号；应用制备的FISH探针检测到γ射线照射诱导的双着丝粒、着丝粒环和易位染色体畸变，37 ℃杂交5-12 h后经过简单的洗涤即可在荧光显微镜下检测到较好的信号。结论：本研究制备的直接标记泛着丝粒探针，可用于FISH快速检测辐射诱导的染色体双着丝粒体、着丝粒环和易位畸变。

关键词: 泛着丝粒探针, 荧光原位杂交, 染色体畸变, 简并引物PCR

Abstract:

OBJECTIVE: To establish a rapid fluorescence in situ hybridization (FISH) method and to analyze the chromosome aberrations induced by irradiation. METHODS：Human centromeric alpha satellite DNA was amplified and directly labeled with Cy3-dUTP or Fluorescein-12-dUTP by degenerate oligonucleotide priming-PCR (DOP-PCR) to prepare two pan-centromeric probes. Chromosome aberrations in lymphocytes of healthy irradiated peripheral blood samples with 60Coγ-rays were analyzed with FISH. RESULTS：Two directly labeled pan-centromeric probes hybridized to the centromeres of all 46 chromosomes. The established rapid FISH method could easily detect chromosome aberrations after hybridizing 5 h to 12 h in 37 ℃ and simple washing. CONCLUSION： FISH method established in this study could be use to rapidly detect the dicentrics，centric rings，and translocations induced by irradiation.

Key words: pan-centromeric probe, FISH, chromosome aberrations, degenerate oligonucleotide priming-PCR

李爽，陆雪，赵骅，封江彬，刘青杰. 辐射诱导染色体畸变的快速FISH方法的建立[J]. 癌变·畸变·突变, doi: 10.3969/j.issn.1004-616x.2014.02.009.

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