目的: 研究 2粒子诱发人支气管上皮细胞 BEP2D 恶性转化中 DNA 修复基因 DNA2PK的结构和表达变化。方法:用反应2单链构象多态性 PCR2SSCP 分析基因编码序列结构变化。结果:癌变细胞中DNA修复基因 Ku70 XRCC26 的编码碱基发生突变 ,第 1 148～1 153 位点由 AGGATC突变为 GAGTAC,致使编码的α氨基酸由 RI变为 EY;细胞恶性转化过程中 ,DNA修复基因DNA2PKcs XRCC27 的表达发生改变 ,在恶性转化早期即 2粒子照射后第 21 代就已被抑制 ,但发生癌变 第 35 代 后 ,部分细胞克隆的该基因表达又重新上调。结论:DNA修复基因 DNA2PKα 的结构和表达的变化 ,导致细胞DNA修复能力缺陷 ,基因组不稳定性增加 ,是 2粒子癌变的分子机制之一。

目的: 研究以荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization , FISH) 技术评价了中草药昆明山海棠根部水抽提物[ Tripterygium hypoglaucum ( Level) Hutch , THH]在小鼠骨髓细胞中的特异染色体不分离效应。方法:以受试物THH 腹腔注射昆明种雄性小白鼠,24 h 后取骨髓细胞常规制片,以bio-16-dUTP 标记的8 号染色体特异性着丝粒重复顺序探针进行FISH ,并以streptavidine-Cy3 与杂交信号结合。荧光显微镜下分析受试物处理动物后骨髓细胞8 号染色体分离情况。结果:在3 个受试剂量中,THH 具有与阳性对照秋水仙素类似的作用趋势,其所诱发的8 号染色体不分离频率均显著高于溶剂对照。结论:本研究证实了THH 为小鼠骨髓细胞8 号染色体异常分离的诱发因素。

目的: 研究不同浓度的一氧化氮(nitric oxide ,NO) 对食管癌细胞核DNA 损伤作用的特征性规律。方法: 以硝普钠(sodi2 um nitroprusside ,SNP) 作为NO 的体外供体,以食营癌细胞系EC109 作为细胞模型,采用单细胞凝胶电泳法检测不同浓度的 SNP 作用一定时间后,食管癌细胞核DNA 被损伤的情况。结果:无论SNP 的作用时间是8 h ,还是16 h ,彗星状细胞核所占的 百分率均越来越高,经χ2 检验差异有显著性意义( P < 0. 01) 。曲线回归分析结果表明,食管癌细胞彗星状细胞核生成的百分 率与SNP 的浓度之间明显相关。结论:在一定的条件下,NO 对食管癌细胞核DNA 的损伤作用具有明显的浓度依赖性特征。

目的: 研究人类端粒酶(hTR) 基因的反义核酸对K562 细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响。方法:采用TRAP 法检K562 细胞在反义核酸处理前后端粒酶活性的变化,以及采用TUNEL 法观察反义核酸处理前后细胞凋亡的变化。结果: hTR基因反义核酸能有效抑制K562 细胞的端粒酶活性,并且诱导K562 细胞发生凋亡。结论:hTR 基因反义核酸能显著抑制肿细胞的端粒酶活性,为恶性肿瘤治疗提供了一条新的有效的途径。

目的: 探讨脆性组氨酸三联体(FHIT) 基因和p53 基因在胃癌中的表达及其与临床病理因素的关系。方法: 采用免疫组化SP 法检测78 例胃癌组织中FHIT 和p53 的表达。结果: FHIT 和p53 在胃癌中表达率分别为43. 6 %和52. 6 %。FHIT 蛋白的丢失在胃癌中占56. 4 % ,两者与胃癌的组织类型、浸润深度、临床分期和淋巴结转移状况无关( P > 0. 05) 。结论: ①胃癌组织中FHIT 蛋白的丢失是频发事件,FHIT 可能是胃癌发生中重要的候选抑癌基因; ②测定FHIT 和p53 的表达,可用于高 危人群的筛选。

目的: 三氧化二砷(As2O3) 已被证实对治疗某些白血病有效,引起白血细胞和某些实体瘤细胞凋亡。本文着重观察小剂 量As2O3 (0. 1μmol/ L 和0. 5μmol/ L) 对食管癌细胞SHEEC1 的作用。方法:食管癌细胞于瓶中培养,以0. 1μmol/ L ,0. 5μmol/ L 和5. 0μmol/ L As2O3 处理。结果:大剂量(5. 0μmol/ L)As2O3 引起SHEEC1 凋亡和生长的抑制。小剂量As2O3 (0. 5μmol/ L) 提高核分裂指数,DNA 荧光定量检测可见DNA 合成增加,电镜下可见SHEEC1 细胞处于增殖状态,出现细胞质线粒体和多聚 核糖体增多,细胞核中可见多个核仁。结论:低剂量As2O3 可促进食管癌细胞增殖和DNA 合成,因此As2O3 具有促细胞分裂作用的特性。

目的: 研究纤维蛋白胶对体外培养小鼠胚胎发育的影响。方法:超排获取昆明小鼠2 细胞期受精卵,常规配制纤维蛋白 胶,比较小鼠胚胎常规培养与在纤维蛋白胶上培养的囊胚发育率及孵化率,以及内细胞团染色体数目变化。结果:小鼠胚胎在 纤维蛋白胶上培养与常规培养,囊胚发育率及孵化率分别为:67. 5 %和66. 7 %( P = 0. 837 , Yetes corrected) , 38. 5 %和34. 0 %( P = 0. 159 , Yetes corrected) 。内细胞团染色体数目绝大部分为2n = 40 ,基本保持核型稳定。结论:纤维蛋白胶对体外培养 的小鼠胚胎无不良影响,可以作为研究胚胎营养因子对胚胎影响的载体基质。

目的: 研究体外培养的人肝细胞经苯并[κ]萤蒽(BκF) 诱导后其细胞色素P4501A(CYP1A) 亚家族的组成。方法:采用 Bis2Tris2HCI 缓冲的聚丙烯酰胺凝胶免疫印迹电泳系统和多克隆羊抗人CYP1A1/ CYP1A2 及兔抗人CYP1A2 抗体对经5 μmol/ L BκF 诱导24 h 的6 名捐献者的肝细胞中表达的CYP1A1 和CYP1A2 进行分离鉴定。结果: 6 份样品中5 份仅检出 CYP1A1 ,而另1 份则2 种CYP 均被检出,其CYP1A1/ CYP1A2 的比值为0. 942 ;溶剂对照诱导的肝细胞CYP1A1 和CYP1A2 均未检出。结论:新鲜的人肝细胞经BκF 诱导后CYP1A 亚家族的表达因人而异,与直接从组织制备的人肝微粒体中的CYP1A 的水平有明显不同。

目的: 构建TEF21δ (mouse translation elongation factor21δ) 的稳定表达系统。方法: 采用磷酸钙介导转染技术和G418 细 胞筛选法,以pcDNA3. 1/ V52His2TOPO 为表达载体,构建了TEF21δ转基因CHO 和COS7 细胞系,Western Blot 分析与鉴定表 达蛋白。结果: 在10 株转染和经G418 反复筛选的CHO 细胞系中,有3 株(编码为COH2pcDNA3. 12TEF21δ# 3 , # 6 , # 14) 具 有高效稳定表达的TEF21δ编码蛋白质( Mr 约31 ×103) ,其余CHO 细胞株的TEF21δ蛋白质表达相对较弱或无表达。在4 株 转染和经G418 反复筛选的COS7 细胞系中,4 株细胞(编码为COS72pcCDNA3. 12TEF21δ # 4 , # 8 , # 14 和# 17) 均有高效稳 定的TEF21δ编码蛋白表达,相应的无转染组及载体对照组的CHO 和COS7 细胞均无TEF21δ蛋白质表达。结论: 这两类 TEF21δ转基因哺乳动物细胞稳定表达系统已成功构建与鉴定,该表达系统的建立对于TEF21δ这一新基因的生物学功能研究,尤其是镉的致癌作用与致癌机制的研究有重要应用价值。

目的: 研究虎纹镇痛肽21 (HWAP21) 的致突变性。方法:采用鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验、中国仓鼠肺成纤维细胞染色体畸变试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验研究了虎纹镇痛肽21 的致突变作用。结果:Ames 试验结果:HWAP21 的4 个剂量组(1μg/ 皿～1 000μg/ 皿) ,在活化及非活化条件下诱发TA97 、TA98 、TA100 和TA102 菌株的回变菌落数未见明显增加;染色体畸变试验结果:HWAP21 的4 个剂量组(263μg/ 皿～2 100μg/ ml) ,在活化及非活化条件下CHL 细胞染色体畸变率小于5 %;微核试验结果:HWAP21 在100μg/ 皿～460μg/ kg 剂量范围内,小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率未见明显增加。结论:在本试验条件下,HWAP21 无致突变作用。

目的: 研究无花果提取液(fig extract ,FE) 致突变及抗突变效应。方法:用体外人淋巴细胞微核测试法,研究了FE 对丝裂霉素C(MMC) 和γ-射线诱变作用的影响。结果: FE 0. 05～0. 45 (g/ ml) 剂量范围内,对人淋巴细胞无致突变性,但可拮抗MMC 和γ-射线诱发突变和老年人、肿瘤患者自发微核形成。结论:FE 具抗突变作用。

目的: 观察海藻多糖(PS) 的抗辐射效应。方法:观察PS 对60Co γ-射线诱发的小鼠外周血淋巴细胞及骨髓嗜多染红细胞微核率的影响。结果:小鼠接受2 Gy γ-射线照射后,外周血淋巴细胞及骨髓嗜多染红细胞微核率明显升高( P < 0. 01) ;20 mg/kg·bw 及40mg/ kg·bw 剂量的PS 能使照射小鼠外周血淋巴细胞微核率明显降低( P < 0. 05) ; 10 mg/ kg·bw、20 mg/ kg·bw 及40 mg/ kg·bw 剂量的PS 能使照射小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率明显降低( P < 0. 05) 。结论: PS 对γ-射线诱发的染色体损伤有明显的保护作用。

目的与方法　采用大鼠致畸胎、小鼠骨髓细胞染色体畸变(CA) 分析检测萌动激活赤灵芝孢子粉的致畸胎、致突变和抗 突变性。结果: ①灵芝孢子粉小鼠骨髓细胞CA 率与阴性对照组比较差别无显著性( P > 0105) 。②灵芝孢子粉对孕鼠体重、胚 胎早期发育、胚胎生长发育、以及胎鼠的骨骼发育和内脏器官发育均无不良影响。③灵芝孢子粉各剂量对40 mg/ kg、50mg/ kg 环磷酰胺(CP) 诱发的小鼠骨髓细胞染色体畸变率有明显的抑制作用( P < 0. 05 , P < 0101) ,抑制率分别为5612 %、3411 %、 3918 %和6718 %、5919 %、5210 % ,对50 mg/ kg CP 诱发的CA 抑制率在52. 0 %以上,并有剂量反应关系。结论:萌动激活赤灵 芝孢子粉未见致畸胎和细胞染色体损伤作用,对化学物引起的染色体损伤具有一定的拮抗或保护作用。

目的为保证新药轻灵 盐酸西布曲明(Ql2sibutramine) 的临床用药安全,评价其生殖毒性,进行了大鼠致畸试验。方法:设3 个剂量组:0. 50 mg/ (kg·d) ,3. 16 mg/ (kg·d) 和20 mg/ (kg·d) ,最高剂量相当于临床拟用量的14. 8 倍,另设溶剂对照组和阳性对照组。于孕期6～15 d 经口给予受试物,检查对孕鼠和胎鼠的毒性和致畸性。结果:3 个轻灵2盐酸西布曲明剂量组均未诱发畸形,也不影响受精卵着床和胚胎存活,但中、高剂量组孕鼠呈现一定的毒性反应(摄食量减少和体重增长缓慢) ,胎鼠平均体重和身长也降低。结论:轻灵2盐酸西布曲明无致畸性,但有一定的母体毒性及发育毒性。

目的: 观察地洛他定对孕鼠致畸敏感期的毒性,包括对母体和对胚胎发育的影响。方法: ICR 小鼠于妊娠第6～15 d 灌胃给予地洛他定,剂量为50. 0 mg/ kg·bw、25. 0 mg/ kg·bw 和12. 5 mg/ kg·bw ,同时设立阴性和阳性对照组,检查孕鼠体重、一般行为特征和胎鼠发育各项指标。结果:地洛他定高、中剂量组孕鼠出现了母体毒性。高剂量组死胎数(率) 、吸收胎数(率) 显著高于阴性对照,且有2 窝胎鼠共出现2 例变形肋(2/ 44) ;低剂量组胎鼠有1 例左后肢短小(1/ 152) ,1 例卷尾(1/ 152) ,但与阴性对照比较皆无显著性差异。结论:本实验条件下,地洛他定在较高剂量时有母体毒性和胚胎毒性。

目的: 观察葡萄( V itis vinif era) 籽原花青素的抗诱变作用。方法:以S almonella typhimurium TA97 、TA98 、TA100 、TA102为标准试验菌株进行Ames 试验。结果:在不加S9 条件下,原花青素能显著抑制Dexon 诱发的TA97 、TA98回复突变,叠氮钠诱发的TA100回复突变,丝裂霉素C 诱发的TA102回复突变;在不加S9 条件下,原花青素能显著抑制2-氨基芴诱发的TA97 、TA98及TA100回复突变,而对1 ,8-二羟基蒽醌诱发的TA102回复突变抑制作用较强。结论:葡萄籽原花青素对多种化学诱变剂 有抗诱变作用。

蛋白质组学是后基因组时代的一个新兴领域,其理论和技术的发展为化学致癌物致突变的分子机制的研究提供了新的 思维方式。本文回顾了蛋白质组学的研究技术,包括双向凝胶电泳、质谱和生物信息学近年的主要进展,并介绍了本实验室 利用蛋白质组学的技术,研究低浓度烷化剂引起的细胞应答反应所取得的初步结果。

癌症易感基因是近几年研究的热点之一。癌症易感基因异常所致的肿瘤综合征具有遗传性及伴有其他器官病变等特性。不同类型的癌症易感基因突变可引起不同的肿瘤综合征。通过对病人肿瘤发生的家族史的了解、遗传学咨询、遗传学试验等措施可以对不同的遗传性肿瘤综合征提出相应的防治策略。

目的: 了解抗癌药物对细胞株增长的影响及凋亡诱导作用。方法: 药物与细胞株共同孵育不同时间后,应用四唑盐(MTT) 比色法及流式细胞仪(FCM) 分别测定细胞增长抑制率(CI) 及细胞凋亡指数(APOI) 。结果: 抗癌药物组CI 值及APOI值与对照组相比均有显著差异(P < 0. 05) 。经相关分析得出,APOI 与CI 呈正相关( r = 0. 42 , P < 0. 05) 。结论:7 种抗癌药物均能明显抑制细胞株增长,并可诱导其发生凋亡。利用MTT 法及FCM 测定细胞CI 和APOI ,有利于化疗方案的设计,指导 临床合理用药。