目的:研究电离辐射对人类DNA 修复基因hR24L 表达的影响。方法:通过RT - PCR 从人乳腺癌MCF7 细胞总RNA 中扩增hR24L 的开放阅读框(ORF) ,经测序无突变后用γ射线照射细胞。照射后不同时间收集细胞,提取总RNA ,用Northern印迹杂交分析hR24L 表达变化。结果:hR24L 基因的转录在电离辐射后1 h 后开始上升,2 h 达高峰,3 h 恢复正常。结论:该基因的表达具有损伤诱导性特点,对γ射线损伤有修复作用。

目的:在离体条件下,通过猪脑微管蛋白的聚合和解聚合反应,分析两种乙酰胆碱受体抑制剂—阿托品和筒箭毒碱对微管蛋白聚合的影响。方法:将受试物加入微管蛋白聚合/ 解聚合反应体系中,于37 ℃、350 nm 下检测反应体系吸光值的变化。结果:阿托品和筒箭毒碱均使反应体系吸光值显著下降,提示它们对微管蛋白聚合具有明显的抑制效应。结论:受试化合物可能通过影响微管蛋白聚合来影响有丝分裂进而引发非整倍体。

目的:探讨用彗星试验检测DNA 交联剂作用的时间 效应关系及验证其应用的可行性。方法:以过氧化氢(H2O2 ) 作标准DNA 断裂剂,用彗星试验对甲醛诱导TK6 细胞DNA 交联作用的时间2效应关系进行了探讨,并用甲醛和丝裂霉素C 进行了验证。结果:在一定浓度范围内,随着甲醛和丝裂霉素C 浓度的增加,由H2O2 造成的TK6 细胞DNA 迁移距离逐渐减小。时间效应的研究表明,在H2O2 浓度一定时,随着甲醛染毒时间的延长,其DNA 交联作用增加。结论:彗星试验既可检测DNA-蛋白质交联又可检测DNA-DNA 交联,对DNA-蛋白质交联的检测更敏感。

目的:观察转人TNFα基因对肾细胞癌细胞(RCC) 致瘤性的影响,为进一步对RCC 的基因治疗打下基础。方法:将人TNFα基因构建入逆转录病毒载体,经包装、鉴定后,感染RCC 细胞株78620 , EL ISA 法测转人TNFα基因78620 细胞上清中TNFα的活性,同时,将转人TNFα基因的78620 细胞接种裸鼠,观测转TNFα前后RCC 细胞致瘤性的变化。结果: 转人TNFα78620 细胞上清TNFα的浓度平均为(5 004 ±624) pg/ ml ,接种裸鼠后无肿瘤长出。结论:转人TNFα基因使建株RCC 失去了致瘤性。

目的:了解珍香胶囊对裸鼠原位移植的人胃癌的疗效,为临床试验提供科学依据。方法:用珍香胶囊分别对人胃低分化腺癌SGC27901 以及人胃高分化腺癌MKN228 裸鼠原位移植模型进行治疗。实验分5 组:珍香胶囊高浓度组(4 800 mg/ kg·bw) 、中浓度组(2 400 mg/ kg·bw) 、低浓度组(1 200 mg/ kg·bw) 以及阳性对照组(丝裂霉素C 1 mg/ kg·bw) 和阴性对照组(生理盐水) 。珍香胶囊灌胃给药,每天2 次,连续给药40 次,丝裂霉素C 皮下注射给药,每2 天1 次,共给药10 次。实验以荷人胃癌裸鼠的生命延长率、胃指数、血清唾液酸(SA) 含量作为疗效评价指标。实验重复3 次。结果: ①珍香胶囊高、中、低三剂量对荷人胃癌SGC27901 裸鼠生命延长率分别为57. 78 %～72. 03 %( P < 0. 01) ,42. 22 %～56. 59 %( P < 0. 01) 、28. 13 %～33. 79 %( P < 0. 01) ,阳性对照丝裂霉素C 对荷人胃癌SGC27901 裸鼠生命延长率为52. 58 %～60. 02 %( P < 0. 01) ; ②经珍香胶囊高、中剂量治疗后,荷人胃癌MKN228 裸鼠的胃指数、血清SA 含量显著减少( P < 0. 01 或P < 0. 05) 。结论:在裸鼠可耐受的剂量下,珍香胶囊对裸鼠原位移植的人胃低分化腺癌SGC27901 以及人胃高分化腺癌MKN228 均有明显的抗癌作用,且随着剂量增加,其抗癌疗效增强。

目的:探讨亚硒酸钠对小鼠的胚胎毒性、致畸作用、致畸剂量和致畸特性。方法:采用小鼠整体致畸试验,测量胎鼠的体重、体长、尾长,统计胎鼠死亡率和吸收率,观察内、外部畸形,并对胎鼠的上枕骨、胸骨、指骨等骨骼的骨化点的骨化程度进行分级与计数;运用方差分析、χ2 检验及秩和检验等方法对所得数据进行统计分析。结果:低剂量(0. 6 mg/ kg·bw) 为无作用剂量,中(3 mg/ kg·bw) 、高(15 mg/ kg·bw) 剂量组的枕骨、指骨及胸骨有明显骨化不良和发育迟滞现象,与正常组比较,具有显著性差异( < 0. 05～0. 005) 。 亚硒酸钠有胚胎毒性作用,但未发现引起内脏及外部畸形。

目的:用Ames 试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、人体外周血淋巴细胞姐妹染色单体交换(SCE) 试验以及小鼠精子畸形试验对重质芳烃进行了致突变性研究。结果:重质芳烃无移码突变和碱基置换效应,微核试验显示在316～1 580 mg/ kg·bw 剂量范围小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率显著增加(与阴性对照组比较P < 0. 01) ;SCE 试验结果显示在活化系统(S9 混合) 存在的条件下,人外周血淋巴细胞SCE 频率较对照组显著增高(在0. 5 mg/ ml 及5 mg/ ml 剂量组) ;小鼠精子畸形试验显示在1 580 mg/ kg·bw 剂量水平小鼠精子畸形率显著增高,与阴性对照组比较差异有显著性( P < 0. 01) 。结论:重质芳烃具有间接致突变性,对其职业性接触及应用的安全性应给予高度重视。

目的与方法:为了建立稳定表达bcl-2 蛋白的肝细胞癌(简称肝癌) 细胞株,用脂质体介导的基因转染法将含有人bcl-2 cDNA 的逆转录病毒表达载体pDOR-SB 质粒导入bcl-2 蛋白阴性的肝癌细胞系HCC-9 204 细胞中。经G-418 筛选后获得转入bcl-2 基因的细胞克隆。细胞扩大培养后用免疫细胞化学法检测bcl-2 表达情况。有限稀释法连续克隆化直至获得100 %稳定表达bcl-2 蛋白的单克隆细胞株,并进行流式细胞仪检测。结果:转染了pDOR-SB 的HCC-9 204 细胞大部分为bcl-2 蛋白表达阳性,而转染了pDOR 空载体或未转染的HCC-9 204 细胞均为bcl-2 蛋白阴性。经过连续3 次克隆化后,流式细胞仪检测表明所获得的单克隆细胞株100 %表达bcl-2 蛋白。结论:用基因转染法成功地建立了稳定表达bcl-2 蛋白的肝癌细胞株。

目的与方法:为探Wilms 瘤中p16 基因表达与肿瘤病理分型和临床分期之间的关系,应用免疫组织化学SP 方法,对52 例Wilms 瘤及7 例肿瘤周围正常肾组织(对照) 手术标本中p16 基因的表达情况进行检测。结果:52 例wilms 瘤中有16 例p16基因表达阳性,阳性率为30. 8 % ,其中预后良好型p16 基因表达阳性率为37. 2 %(16/ 43) ,预后差者为0 %(0/ 9) ,均明显低于正常对照100 %(7/ 7) ,差异具有显著的统计学意义( P < 0. 05) 。在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ临床期中, p16 表达阳性率以Ⅰ期最高,逐步递减,分别为47. 6 %(10/ 21) 、37. 5 %(3/ 8) 、28. 6 % (2/ 7) 、6. 3 %(1/ 16) 。结论:Wilms 瘤中p16 基因表达与肿瘤病理分型和临床分期存在联系, p16 基因失活似是Wilms 瘤发生发展中的晚期事件。

目的与方法:采用蚕豆根尖微核试验技术对两种市售二氧化氯(ClO2) 的诱变性进行研究。结果:在ClO2 的稀释度为1 :100时,杭州产ClO2 (A 样) 与余杭产ClO2 (B 样) 蚕豆根尖细胞微核率(MNF) 分别为(17. 91 ±4. 80) ‰和(17. 57 ±3. 15) ‰。,与作为阴性对照的自来水相比较,均有显著的统计学差异( P < 0. 01) ,并呈现较强的剂量2反应关系。结论:消毒剂ClO2 能诱发蚕豆根尖细胞微核率的增加,具有一定的诱变性。

目的与方法:应用蚕豆和大蒜根尖细胞微核技术对涑水河闻喜河段污水及其沿岸井水遗传毒物的污染状况进行了检测。结果:蚕豆检测结果表明,涑水河闻喜河段5 个采样点河水都受到了遗传毒物的污染,污染程度依次为东桥> 吕庄水库> 店头> 孙村> 苏村;在近岸5 个样点中店头、孙村、吕庄水库和东桥4 个样点的井水被污染,在远岸5 个样点中吕庄水库和东桥2样点的井水被污染。用大蒜检测河水的结果与蚕豆检测的结果一致,呈高度正相关( r = 0. 9503 , P < 0. 01) 。大蒜检测沿岸井水的结果表明,近岸的店头和东桥2 个样点的井水被污染,远岸的东桥样点的井水被污染,与蚕豆检测结果呈正相关( r= 0. 8790 , P < 0. 025) 。结论:以上结果显示,涑水河闻喜河段河水及其沿岸的部分井水均受到了遗传毒物不同程度的污染。大蒜可作为检测细胞遗传损伤的植物加以开发利用。

目的与方法:改良一种适用于流行病学研究的N2乙酰化转移酶(NAT2) 基因型的等位基因特异PCR(AS2PCR) 检测方法,分析了3 个NAT2 基因突变点:481 T、590 A、857 A ,并用此法对76 例南京地区健康人群的NAT2 基因型多态性进行了研究。从而也检验了该方法。结果:该人群中各基因频率:Wt (野生型) 为0. 5723 :481 T 为0. 0395 ;590 A 为0. 2368 ;857 A 为0. 1513 。与白种人比较差异有显著性,而与文献报道的亚州人群频率分布特征基本一致。结论:南京地区健康人群中与快反应相关的NAT2 基因型占多数(82. 9 %) ;本文改良的AS2PCR 检测方法经验证为NAT2 基因多态性研究的有效实验手段。

探讨沙林对人类染色体的影响。方法:在沙林毒性气体事件中,检测了8 名暴露者、49 名对照者的外周血淋巴细胞姊妹染色单体交换频率( SCE) 并进行了统计学分析。结果: 暴露组的SCE 为(41916 ±11480) / 细胞,对照组为(31766 ±01620) / 细胞,经Cochran t test 单尾检验, P < 0. 05 ,呈现弱阳性结果。结论:阳性结果的主要原因是3 名症状严重的暴露者的CE 偏高,这可能与在抢救治疗过程中过量使用阿托品(疑为致畸性药物) 有关,沙林估算量和阿托品摄入量之比为1∶95 ,1∶25 。但最终还需一些符合逻辑的、合理的实验和更长时间的暴露人群追踪调查的结果来作定论。对有机磷杀虫剂中毒病人的治疗应尽可能地交替和复合使用特效解毒药和胆碱脂酶复能剂,尽量减少可能由治疗药物产生的负面影响。

目的:研究仙华胶囊是否具有抗突变效应。方法:设190 mg/ kg·bw、380 mg/ kg·bw、1 130 mg/ kg·bw 3 个剂量组和1 个致突变物对照组,每组昆明种小鼠10 只。采用小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠睾丸染色体畸变试验和Ames 试验进行研究。结果:与致突变物对照组比较,仙华胶囊对环磷酰胺诱发的小鼠骨髓细胞微核的发生、对丝裂霉素C 诱发的小鼠睾丸细胞染色体的畸变以及致突变物对菌株TA100 和TA98 的致突变作用均有明显的抑制作用,对致突变物有灭活作用。结论:仙华胶囊具有一定的抗突变作用。

目的:研究宫颈癌组织中细胞凋亡的表达。方法:采用HE 和甲基绿哌咯宁两种组织化学染色法对28 例宫颈鳞癌、11 例CIN、5 例慢性宫颈炎及2 例正常宫颈组织中的凋亡细胞进行检测。结果:宫颈组织不同,细胞凋亡率有显著差异( P < 0. 05) ,两种组织化学染色法显示宫颈癌组织中的凋亡细胞较典型。结论:本研究结果显示宫颈癌组织中细胞凋亡率明显高于CIN 及慢性宫颈炎组织。

目的:探讨预先给予低剂量环磷酰胺、丝裂霉素和氟尿嘧啶等抗肿瘤药物对小鼠肉瘤S180 的抑制作用。方法:昆明种小鼠接种肿瘤细胞后第5 d 起在给予常规剂量前6 h 预先给予低剂量环磷酰胺等药物,连续6 d。第12 d 处死动物,计算肿瘤抑制率。结果:环磷酰胺、丝裂霉素C 和氟尿嘧啶在预先给予低剂量与单纯常规剂量下,肿瘤抑制率分别为52. 19 %、36165 %;48161 %、31187 %;39144 %、27. 89 % ,前2 者之间存在显著性差异( P < 0105) 。结论:预先给予低剂量环磷酰胺、丝裂霉素C 能增强常规剂量药物对小鼠肉瘤S180 的抑制作用。

目的:建立精子单细胞凝胶电泳技术(SCGE) 。方法:借鉴国外文献,在体细胞SCGE 基础上,结合脉冲场电泳技术,建立本实验方法。结果与结论:通过试验条件的改变,简化了实验方法,缩短了试验时间,建立精子SCGE 检测技术。

肿瘤的发生机制目前尚不明确,一般认为是环境因素和遗传因素相互作用的结果。P450 酶属Ⅰ相代谢酶,可代谢多种化学物和药物,并可形成致癌性的物质。人谷胱甘肽2S2转移酶( GST) 属Ⅱ相代谢酶,是催化谷胱甘肽( GSH) 与亲电子的外源物结合的二聚体酶,并可灭活外源物,促使它们排出体外,它们在人群中呈多态性分布。肿瘤的遗传易感性与代谢酶遗传多态性是密切相关的。通常情况下,大多数致癌物的形成,首先通过Ⅰ相代谢酶的活化(如P450 酶) ,灭活主要通过Ⅱ相代谢酶(如GST 酶) 进行的。因此, Ⅰ相代谢酶与Ⅱ相代谢酶的多态性往往决定癌症的发生率及发生类型。

为减少误差,提高试验效率和结果的可靠性并与国际接轨提供一些参考。复习了近十年来国际上部分有关药物生殖毒性整体动物试验的指南、综述祁探讨性研究,主要讨论了试验研究中的关键性问题及其研究策略。

(上接2000 年第1 期第66 页)