为了探讨线粒体DNA(mtDNA) 在细胞癌变中的作用,实验采用一步法快速制备癌细胞系mtDNA ,用Pvu Ⅱ、Xho Ⅰ、Pst Ⅰ、EcoR Ⅰ、Bst E Ⅱ、Hind Ⅲ、Hpa Ⅰ、Bcl Ⅰ、EcoR Ⅴ、Sca Ⅰ和Xba Ⅰ共11 种限制性内切酶对SPC - A - 1 细胞系的mtDNA 进行了限制性片段长度多态性(RFL P) 分析,并根据单酶切及双酶切结果,构建了SPC - A - 1 细胞系mtDNA 限制性酶切图谱。结果发现,SPC - A - 1 细胞mtDNA 基因编码区的32 个酶切位点均无变异,仅在其mtDNA 非编码区第16276 位核苷酸处出现了EcoR Ⅴ新的酶切位点。结果表明SPC - A - 1 细胞mtDNA 基因编码区结构相当稳定,而主要的核苷酸变异可能位于其mtDNA 非编码区。

本文采用近年来发展的单细胞凝胶电泳试验检测了二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳及一氯乙酸和三氯乙酸对V79细胞的DNA 损伤作用。结果显示:五种受试物均可引起体外培养的V79细胞DNA 损伤,但其作用强度差异很大。其顺序为四氯化碳> 三氯甲烷> 二氯甲烷> 一氯乙酸> 三氯乙酸。该结果还提示:五种氯化有机物对V79细胞的毒性及DNA 损伤作用的大小顺序是一致的,氯化烷基类化合物的细胞毒性及DNA 损伤作用均大于氯乙酸类,在氯化烷基类化合物中,其DNA 损伤作用是随化合物中氯原子数目的增加而增强的。

本研究目的建立差异显示技术,将其应用于辐诱发肺癌发生相关基因研究中。取SHTF 细胞(SV40 永生化人胎气管成纤维细胞) 和αSHTF 细胞(α粒子照射后能在软琼脂上形成克隆的SHTF 细胞) 以及肺癌组织和同例正常肺组织为模板,将其mRNA 进行RTPCR 扩增,采用放射自显影法和硝酸银染色法显示扩增片段,并比较两者的显示效果。结果表明:在细胞和组织样品中均建立了差异显示法,但硝酸银染色的条带较放射自显影显示的清晰,再扩增后的显示率也较高,两者的复显示分别为80 %和50 %。结论:在细胞和组织样品中成功地建立了差异显示法,改进的条带显示法提高了复显率,为确定相关基因奠定了基础。

本文采用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠精子畸形试验,探讨中药五加皮的体内抗诱变作用。结果表明,五加皮各剂量(1g/ kg ,2g/ kg ,4g/ kg) 对MMC 诱发的微核率和精子畸形率均有明显的拮抗作用( P < 0. 01) ,微核抑制率达50.5 % - 73. 27 % ,精子畸形抑制率高达73. 45 % - 84 %。结果提示,五加皮具有拮抗MMC 诱发的体细胞和生殖细胞遗传损伤的作用。

本文提出了一种检测及评价土壤生态系统中遗传毒性的新方法。赤子爱胜蚓( Eisenia f oetida) 经人工土壤法染毒,暴露于不同剂量的两种新型杀虫剂———呲虫啉和抑食肼中,观察它们对蚯蚓精子形态的影响。实验结果表明,呲虫啉在浓度大于0. 5mg/ kg 干土时对蚯蚓精子畸变率有明显影响( P < 0. 01) ,并呈现剂量效应关系;而抑食肼在浓度高达100mg/ kg 干土时,与对照组相比才有显著差异( P < 0. 05) 。

本文对大亚湾核电站运转前后(1992～1996) 其附近地区两栖类动物的细胞凋亡进行了观察和比较。结果表明:在所观察细胞凋亡的6 项形态学特征中,皆无明显变化( P < 0. 05) 。提示在大亚湾核电站运转的头3 年,对最近距离环境中动物的细胞凋亡没有明显影响。

对长期皮下埋植NorplantR Ⅰ型和CLa 型避孕药剂的妇女和正常对照组的妇女的染色体畸变、姊妹染色单体互换及细胞微核等细胞遗传学指标进行了研究。结果提示:NorplantR Ⅰ型可增加其应用者体内细胞诱变性环境的存在,使其染色体畸变率和姊妹染色单体互换率显著性增加,且有统计学意义,故应引起对长期皮下埋植NorplantR Ⅰ型长效避孕皮埋药剂是否存在致突变作用问题的重视和进一步研究。CLa 型长效避孕皮下埋植药剂未发现有明显的致突变作用,从细胞遗传学角度上看是安全的。

建立永生化气管成纤维细胞系为研究细胞恶性转化提供实验模型。用pZIPSV40T 转染原代人胎气管成纤维细胞,G418 筛选,挑取阳性克隆传代培养,并进行细胞生物学特性鉴定。结果表明,细胞经pZIPSV40T 转染后,形态较正常细胞略短,排列不规则,当传至50 代时仍生长良好。Southern blot 证实此转化细胞整合了SV40T 基因。永生化细胞接种的第4 天细胞为指数生长期,染色体核型以非整倍体为主,不能在软琼脂上形成克隆,接种裸鼠不能形成肿瘤。

为了寻求一种理想的石棉表面改性剂,本研究观察了柠檬酸铝、混合稀土或亚硒酸钠对温石棉诱导人胚肺(HEL) 细胞染色体改变的影响。结果显示,温石棉可致HEL 细胞染色体畸变率和姊妹染色单体交换率升高。经三种化合物预处理的温石棉,其所诱导的HEL 细胞的染色体畸变率和姊妹染色单体交换率均低于未处理温石棉组。提示,用三种化合物预处理温石棉,均可降低温石棉对细胞染色体的损伤作用,从而有可能减轻温石棉对人类的致癌危害性。

以小鼠骨髓细胞微核试验评价了强化全营养乳(Fortified Full-Nutritional Milk , FFNM) 抑制间接诱变剂环磷酰胺(Cyclophos phamide , CP) 的诱变作用,并观察了FFNM 对小鼠移植性S180肉瘤、艾氏腹水癌( Ehrlich Ascites Carcinoma , EAC) 及可移植性小鼠膀胱癌BST739生长的影响。结果表明,预防性给予FFNM 可以明显抑制CP 引起的小鼠骨髓嗜多染红细胞微核形成,说明FFNM 对化学诱变剂引起的染色体断裂有一定保护作用,具有抗突变作用。FFNM 对皮下移植S180和BST739所形成的实体肿瘤的生长具有一定的抑制作用,而未能延长移植EAC 动物的存活期。该乳制品在肿瘤病人中的作用,值得进一步研究。

为研究A - CM 海洋生物制剂的抗突作用,进行了抗细菌回复突变试验,抗微核效应试验和抗DNA 氧化损伤试验。结果表明:在未加S9 条件下,A - CM 制剂可抑制叠氮钠诱发的组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门氏菌TA100 菌株突变。A - CM 喂养小鼠,可抑制随饲料摄入的诱变剂Cd2 + 和NO-2 引发的骨髓嗜多染红细胞微核。体外试验可有效防护H2O2 对人血白细胞DNA 的氧化损伤。提示A - CM 制剂对某些毒物诱发的DNA 和染色体水平的突变均有一定抵抗作用。

Wistar 雌、雄大鼠在交配前每周一次iv 给予去乙酰基长春花碱酰胺硫酸盐(vindesine sulfate , VDS) ,共分别给药3 次和9 次,各组剂量分别为0. 05mg/ kg、0. 1mg/ kg、0. 2mg/ kg。1∶1 同笼交配2wk ,期间继续按前给药,孕鼠于孕期第6 、12d 各给药一次。结果各剂量组雄鼠体重增重明显减少;高剂量组孕鼠死胎率增加,胎仔尾长和体重明显小于对照组;各剂量组胎仔骨骼发育迟缓,未见外观、内脏和骨骼畸形。结果表明VDS 对Wistar 大鼠具有胚胎毒性,无致畸作用,对两性生育能力未见明显影响。

用小鼠骨髓细胞微核率为指标,观察了两种中药复方,桂枝甘草汤和益胃汤对环磷酰胺诱变的拮抗作用。结果表明:环磷酰胺使小鼠骨髓细胞微核率明显增高。0. 125ml/ d - 0. 5ml/ d 的桂枝甘草汤和0. 25ml/ d - 0. 5ml/ d 益胃汤对环磷酰胺所致微核率的增高有明显的拮抗作用。表明着两种中药有明显的抗突变作用。

采用精子计数,精子活动率,精子形态学指标,观察了槟榔水提取液对雄性小鼠精子的影响。结果发现在3. 75g/ kg.bw 剂量时,能使小鼠精子数量显著减少( t = 1. 8116 , P < 0. 05) ;在7. 50g/ kg. bw、15100g/ kg. bw 时,精子活动率明显降低( U值分别为2. 8142、3. 8966 , P < 0. 01) ;在剂量7. 50g/ kg. bw、3. 750g/ kg. bw 时,精子畸形率明显升高(χ2 值分别为22. 8837、59.50 , P < 0. 01) ;且以无钩、不定形与胖头增加为主。提示槟榔对雄性小鼠生殖功能可能造成一定影响。

应用CHL 细胞染色体畸变试验、Ames 试验和小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验对伊痛舒进行了致突变作用研究。结果显示:0. 00625ml/ 皿、0. 125ml/ 皿、0. 025ml/ 皿、0. 05ml/ 皿、0. 1ml/ 皿各剂量组TA97 、TA98 、A100、TA102 各试验菌珠MR< 2 ;1250mg/ kg、2500mg/ kg、5000mg/ kg 各剂量组PCE 微核率分别为2. 0 ‰、212 ‰、218 ‰,与对照组(410 ‰) 比较无明显差异( P < 0105) ;0. 0125ml/ ml、0. 025ml/ ml、0. 05ml/ ml、0. 1ml/ ml 各剂量组加与不加S9 CHL 细胞染色体畸变率均小于5 % ,表明伊痛舒在该试验条件下无明显致突变作用。

对中国绿茶提取物茶绿色素的致突变作用进行了研究。结果表明:茶绿色素800 (1/ 16LD50) mg/ kg、1 600 (1/ 8LD50)mg/ kg 和3 200 (1/ 4LD50) mg/ kg 各剂量组小鼠骨髓PCE 微核率分别为3. 6 ‰ ,312 ‰,216 ‰,与阴性对照组(218 ‰) 比较均无显著性差异;31215μg/ 皿、625μg/ 皿、1 250μg/ 皿、2 500μg/ 皿、5 000μg/ 皿各剂量组TA97 、TA98 、TA100、TA102 等测试菌株加与不加S9 均未见回复突变率增加(MR < 2) ;茶绿色素800mg/ kg、1600mg/ kg、3 200mg/ kg 各剂量组小鼠睾丸初级精母细胞染色体畸变率与对照相比较无明显差异( P > 0. 05) ,而800mg/ kg 和3 200mg/ kg 剂量组小鼠睾丸初级精母细胞性染色体单价体(4. 8 % ,6. 8 %) 与对照组(2. 5 %) 比较有显著差异( P < 0105) ,各剂量组常染色体单价体与对照组比较无显著差异( P > 0.05) 。

应用CHL 细胞染色体畸变试验、Ames 试验和小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验对多沙唑嗪进行了致突变作用研究。结果显示: 312. 5μg/ 皿- 5 000μg/ 皿各剂量组TA97 、TA98 、TA100、TA102 等菌株回复突变率未见明显增加; 513mg/ kg、1025mg/ kg、2 050mg/ kg 各剂量组PCE 微核率分别为1. 7 ‰、215 ‰、216 ‰,与对照组(210) ‰比较无明显差异( P > 0. 05) ;10mg/ ml、20mg/ ml、40mg/ ml、80mg/ ml、160mg/ ml 各剂量组加与不加S9CHL 细胞染色体畸变率均小于5 % ,但发现正常CHL细胞极少见的染色单体易位,应引起重视。

氮- 乙酰化转移酶(NAT) 为重要代谢酶系,涉及许多致癌物及毒物的降解与活化,有显著的个体差异,可分快慢两种表型。在人群中筛检分辨其表型有着重要的防治肿瘤和预防职业与药物中毒的价值。本文对其检测方法作了探讨,建立了简易快捷的便于在人群中作筛检的方法,测得了代表人群的参比基数,并在膀胱癌,肝癌和肺癌患者中作了测试,在南京调研结果与文献报道和后来在启东,南通的结果极其一致。表明此酶的慢型多态是膀胱癌和肝癌的易感高危因素,从而也验证了本方法。

本文介绍了胎鼠唾液腺体外培养方法,主要就胎鼠唾液腺培养的方法、终点的选择及其评价以及在发育毒性体外研究中的应用等问题进行阐述。这一新型的器官培养方法具有操作简单、快速以及观察终点明确等优点,并涉及较为全面的细胞发育生物学过程,在发育毒物筛选以及发育毒物毒作用机制的研究等发育毒性体外研究中有着较好的应用前景。

(待续）