通过受精卵原核显微注射的途径,产生带有可诱导型丙肝病毒非结构蛋白3 基因( non2structural 3gene) 的重组载体的转基因小鼠。采用PCR 和基因组Southern2blot 杂交方法,在21 只新生鼠中筛选到3 只建立者小鼠。其中2 只与非转基因小鼠进行交配,分别得到8 只和6 只F1 代小鼠。进而对其基因组DNA 进行检测,发现其中4 只为转基因阳性个体。这些小鼠的获得,为ns3 转基因品系的建立和NS3 蛋白的生物学作用研究准备了条件。

从人肝组织中提取总RNA ,用RT - PCR 方法扩增人细胞色素P450 2C9 的cDNA。以T - A 克隆方法将该基因的cDNA 连接到p GEM - 3Z质粒上,然后通过内切酶图谱分析及部分序列分析加以鉴定,结果显示克隆片段具有人细胞色素P450 2C9 内切酶图谱和核苷酸序列,该片断含5′端和3′端部分非编码区及完整的编码区。最后将该cDNA 片段连接到哺乳动物细胞的表达质粒pREP9 中。为建立表达人细胞色素P4502C9 基因的细胞系打下了基础。

对本实验室构建的错配修复功能缺陷细胞HeLa - MLH1 - 的次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(hprt) 基因自发突变率进行检测,发现相对于无hMLH1 缺陷的对照细胞HeLa - R9 和HeLa 而言,其突变率分别提高了8178 倍和3153 倍( P < 0101) ,此表型改变与本实验室已构建的另一错配修复功能缺陷细胞HeLa- MSH2 - 相同。本实验室还证明HeLa - MLH1 - 细胞存在甲基硝基亚硝基胍(methyl-nitro-nitrosoguanidine ,MNNG) 耐受,这与我们在HeLa - MSH2 - 细胞实验中的发现不同,提示不同的错配修复基因功能缺陷对细胞表型影响不尽相同。

本研究系采集山西省8 个大矿务局所属的10 个煤矿,井下掘进工作面煤样16 份,包括7 种煤、即烟煤、无烟煤、弱粘结煤、肥煤、瘦煤、焦煤、气煤,每一份煤将经提取,分成两份;一份进行亚硝化,另一份为非亚硝化煤样,分别进行Ames 试验,SOS 显色试验,双核微核试验,大鼠骨骼细胞染色体畸变分析试验,结果表明:16 份煤样提取物经亚硝化后,其中有10 种Ames 试验。SOS 显色试验均为阳性,从10 种阳性煤尘中,选1至3 种进行染色体畸变分析及双核微核试验,其结果与Ames 试验,SOS 显色试验一致,阳性率为6215 % ,试验中发现,煤样中挥发分的含量高,亚硝化提取物呈较深的棕色液体,均有致突变性,而随着颜色的加深其致突变性增强,提出煤尘中挥发分含量可间接反映出煤样中有机物的含量,挥发分高的煤样,有机物所占比例较大,经亚硝化后,生成具有致突变作用的亚硝基化合物含量相对高,故可表现出强的致突变性。这一发现,可采纳较为简便的测定挥发分的实验,对煤样致突变性进行初筛,以节省大量的人力物力。

本文参照“新药(西药) 毒理技术规范”中有关致畸试验的要求及方法,在昆明鼠中进行了六亚甲基二乙酰胺(HMBA) 的胚胎毒性试验。在小鼠妊娠后6～15d 经尾静脉注射HMBA128. 3mg、320. 7mg 和675mg/kg 体重,分别相当于1/ 25 、1/ 10 和1/ 5LD50 致死剂量,除药物对胎仔体重增长和颅骨骨化过程有不同程度的迟缓作用外,未见其他明显的胚胎毒性,致畸指数≤5 ,故可初步判定HMBA 为非化学致畸源。

我们在1995 —1996 年度用Ames 试验方法,对香港九龙新城区大气有机提取物进行致诱变性分析。结果发现,样品抽提物中既含有移码型突变物也含有置换型突变物,所产生诱变阳性结果的剂量在一些月份仅为2M3/ 皿或5μg/ 皿,表明有关的污染物水平含量较高,但传统研究中的PAH 作用则似乎并不明显,提示有另一类突变物存在。大气提取物的诱变性表现出明显的季节性变化和地域特征,冬季较高而夏季较低并与相邻地区的变化有相关性。

分别用三种不同的诱变剂(MMS、CP 和MMC) ,按不同的剂量对小鼠精子畸形的影响作了研究,对结果作了分析,在此基础上,对实际工作中应用该试验进行样品检测提出了建议。

在人类群体中非整倍性是个严重的遗传问题。这种在数目上的染色体畸变的主要原因是染色体不分离。本实验拟建立一种研究染色体不分离机制与鉴定引起染色体不分离的诱变剂的体系。研究结果表明,紫鸭跖草( radescantia ref lexa) 植物具有较高的染色体不分离自发频率,是一种研究诱发非整倍性的较好体系。

本文报道了维生素A 和亚硒酸钠对菜油烟冷凝物致小鼠毒性作用的影响。结果表明: ①菜油烟冷凝物组小鼠的体重明显低于补充维生素A 组和亚硒酸钠组( P < 0. 01) ; ②菜油烟冷凝物组小鼠的心脏器系数高于补充维生素A 和亚硒酸钠组( P < 0. 05) ; ③补充维生素A 和亚硒酸钠后,可显著地降低菜油烟冷凝物所致的小鼠微核率和精子畸形率( P < 0. 001 和P < 0. 01) ,而单纯菜油组则无致小鼠微核率和精子畸形率升高的作用( > 0. 05) 。

本文应用小鼠骨髓细胞微核和人淋巴细胞体外核异常测试法,以CP 和γ- 线为诱变因子,研究了经络调理胶囊的遗传毒性和抗突变效应。结果表明: ①对放射人淋巴细胞MN 形成无明显影响,但可极显著地拮抗γ- 射线诱发的MN 形成,使之接近对照组MN 水平。②小鼠体内给药时,对骨髓PCE 细胞的生成及MNF 无明显影响,但可极显著地抑制CP 诱发的MN 形成。结合文献,作者认为芝提物可望应用于临床,有助于减轻肿瘤放化疗反应。

代谢酶多态性决定着机体对外源化学物的易感性和耐受性,也是肿瘤发生的遗传易感影响因素之一。本文报道了胃癌病人中N - 乙酰化酶多态性的调研。34 例胃癌病人中13 例为慢型(38124 %) ;对照组107人中20 人为慢型(18169 %) 。基因频率分别016183 和014323 ,两者之间有显著差异( P = 0. 022) 。从中推算出乙酰化酶慢型者患胃癌的相对危险度为2169 (1116～6. 27) ,说明乙酰化酰慢型作为肿瘤遗传易感因素,在胃癌发病中的作用不应忽视。

平阳霉素是具有放射线样作用的药物,为寻找和探讨相应措施防护其化学致癌作用。本文对平阳霉素致小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE) 微核作用及亚硒酸钠对平阳霉素致微核效应的拮抗作用进行了检测。结果表明平阳霉素首次染毒48 小时后微核率最高,且染毒后1 周时间内仍未恢复至正常水平。随着亚硒酸钠投予量的增加平阳霉素引起微核率下降,有明显的剂量效应关系。在0125mg/ kg 和0. 5mg/ kg 两个剂量条件下与阳性对照组均有显著性差异,说明亚硒酸钠对平阳霉素的致微核效应有一定的防护作用。

本文通过Ames 试验TA98 、TA100 菌株和SOS 反应原噬菌体诱导抗突变和致突变同步试验测试了大黄水溶性提取液的抗突变作用。结果表明大黄在4～40mg/ 皿三个浓度,加或不加S9 试验中对柔毛霉素、2AF 所诱发的TA98 的突变、对叠氮钠、环磷酰胺所诱发的TA100 的突变有不同程度的抑制作用,并呈观剂量2效应关系。对移码型致突变剂的作用较优。原噬菌体诱导抗突变和致突变同步试验发现大黄对MMC 诱发的突变也表现出明显的抑制。

采用改进的aPCR - SSCP 银染技术和SP 免疫组化技术检测36 例卵巢上皮癌,12 例卵巢上皮交界瘤和15 例良性卵巢上皮肿瘤的P53基因的突变和突变蛋白的表达。结果卵巢上皮癌P53基因突变率为30. 6 % ,突变蛋白表达为58. 4 %。P53基因突变主要发生在外显子5～8 上,以第7 外显子突变率最高。交界性肿瘤个别出现P53基因突变和突变蛋白表达,而在良性肿瘤无一例出现。提示P53基因突变是卵巢癌形成过程中的晚期事件。P53基因突变可作为肿瘤标记物判定卵巢癌的预后。aPCR - SSCP 非同位素基因突变技术克服了常规PCR - SSCP 检测方法的缺陷,可提高准确性。

(续上期封二)

(略)

（略）

（略）