目的： 研究纳米二氧化钛(TiO2)对大鼠NK细胞活性和相关细胞因子的影响。方法：以SD大鼠为研究模对象，随机分为0.5、4和32 mg/kg 3个纳米TiO2染毒组，对照组(生理盐水)和微米TiO2染毒组(32 mg/kg)。采用支气管滴注染毒，每周2次，实验持续28 d。分别采用流式细胞仪分析外周血NK细胞数目，乳酸脱氢酶释放法检测脾脏NK细胞活性，液相芯片技术测定血清细胞因子IL-2和IFN-γ含量。结果：随着纳米TiO2染毒剂量的增加，脾脏NK细胞活性逐渐增加，高剂量组NK细胞活性与对照组和微米TiO2组相比，差别均具有统计学意义(P < 0.05)。微米TiO2组与对照组相比，脾脏NK细胞活性无明显变化(P > 0.05)。各剂量组外周血NK细胞数目及血清细胞因子IL-2、IFN-γ的变化，与对照组相比差别均无统计学意义(P > 0.05)。结论：在本实验剂量范围内，纳米TiO2可刺激机体产生免疫应答，增加脾脏NK细胞活性，但NK细胞活性及相关细胞因子的长期变化及潜在的机制仍需要进一步探讨。

目的： 观察氢醌对HL-60细胞向单核细胞分化的影响，并初步探讨miR-146a的调控作用。方法：设miR-146a-5p 抑制剂和阴性对照处理的HL-60细胞，分别以不同浓度(0、0.5、1.0、2.5和5.0 μmol/L)的氢醌处理3 h后，接种于含豆蔻酰佛波醇(PMA)的培养基中，培养72 h诱导其分化。采用实时荧光定量PCR检测细胞内miR-146a及其靶基因TRAF6的表达量，流式细胞术检测CD11b和CD14的表达，Western blot检测TRAF6蛋白及其下游调控因子IκBα蛋白的表达水平。结果：与对照组相比(0 μmol/L)， 氢醌可抑制PMA诱导的HL-60细胞CD11b和CD14的表达，5.0 μmol/L的氢醌使其表达量分别减少44%和38% (P均<0.01)；同时miR-146a的表达比对照组升高近2倍(P<0.01)；TRAF6 mRNA的表达下降约40%，其蛋白表达下降74%(P均<0.01)；磷酸化IκBα蛋白的表达减少约45%，IκBα总蛋白表达升高约73%(P均<0.01)。当抑制miR-146a的表达后，氢醌对TRAF6、IκBα和磷酸化IκBα蛋白表达的影响不明显。结论：miRNA-146a是氢醌影响HL-60细胞分化的调控因子之一。

目的： 探讨Toll样受体(TLR)家族成员TLR2基因启动子区-196~-174 del和TLR4基因 Thr399Ile位点多态性与EBV相关胃癌(EBVaGC)及EBV阴性胃癌(EBVnGC)易感性的关系。方法：采用PCR技术检测52例EBVaGC，157例EBVnGC以及94例正常对照人群TLR2(-196~-174 del)基因多态性；PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RELP)技术检测50例EBVaGC，67例EBVnGC以及71例正常对照TLR4 Thr399Ile位点基因型及等位基因分布；分析2种基因多态性与EBVaGC及EBVnGC易感性的关系。结果：胃癌组与对照组比较TLR2(-196~-174 del)基因型分布无显著差异(χ2=3.180，P=0.075)，胃癌组del等位基因频率明显高于对照组(χ2=4.875， P=0.027)，del等位基因携带者的罹患危险性明显高于非携带者(OR=1.491，95%CI=1.045~2.126)；EBVaGC组和EBVnGC组中，TLR2(-196~-174 del)3种基因型以及del等位基因频率差异无统计学意义(χ2=0.05，P=0.867)。EBVaGC组、EBVnGC组和正常对照组中均未发现TLR4基因Thr399Ile位点的多态，其基因型分布及等位基因频率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论：TLR2(-196~-174 del)等位基因可能是胃癌发病危险因素，且在EBVaGC和EBVnGC两种胃癌发生中产生相同的影响。未发现TLR2(-196~-174 del)和TLR4基因Thr399Ile基因型分布与EBVaGC的易感性相关。

目的： 研究氧化苦参碱的抗流感病毒活性及其潜在机制。方法：培养MDCK和A549细胞，并设空白对照组(DMSO， 0.5%)、病毒处理组、阳性对照组(利巴韦林，200 μmol/L)和氧化苦参碱处理组(12.5、25、50、100 μmol/L)，每组重复6孔。空斑抑制法测定氧化苦参碱抗病毒药效；构建荧光素酶报告质粒，并用Western blot和ELISA检测氧化苦参碱对流感病毒诱导的细胞Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)和肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)启动子转录、TLR4-Myd88-TRAF6-NF-κB信号通路活化及炎性因子释放的影响。结果：空斑抑制实验显示氧化苦参碱在12.5～100 μmol/L范围内可显著降低流感病毒复制，其半数有效浓度(EC50)为19.95 μmol/L。与病毒处理组比较，启动子荧光素酶报告质粒检测显示12.5 μmol/L氧化苦参碱可显著降低流感病毒诱导的TLR4、MyD88和TRAF6转录(P＜0.05)；Western blot检测显示12.5 μmol/L氧化苦参碱可显著降低流感病毒诱导的TLR4-Myd88-TRAF6-NF-κB通路的活化(P＜0.05)；ELISA检测显示12.5 μmol/L氧化苦参碱可显著降低流感病毒诱导的IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-8、IFN-β和IFN-γ释放(P＜0.05)。结论：氧化苦参碱具抗流感病毒活性，其潜在机制可能与其抑制流感病毒诱导的TLR4-Myd88-TRAF6-NF-κB信号通路活化有关。

目的： 利用Hoechst33342/PI双染法和原位末端标记法(TUNEL)染色检测纳米二氧化硅(nm-SiO2)对神经细胞凋亡的影响，比较两种检测方法的优缺点。方法：以体外培养的人神经母细胞瘤SK-N-SH为研究对象，15和30 nm粒径的nm-SiO2(剂量为2.5、5、10 μg/mL)分别处理细胞24 h，另设1~5 μm SiO2组和溶剂对照组，采用Hoechst33342/PI双染法和TUNEL染色检测各处理组对SK-N-SH细胞凋亡的影响。结果：与对照组相比，两种检测方法分析均显示了nm-SiO2处理组SK-N-SH细胞凋亡率显著增加(P<0.05)，且具有尺寸、剂量依赖性，而微米级SiO2对凋亡的影响不显著(P>0.05)。结论：nm-SiO2能诱导SK-N-SH细胞凋亡。Hoechst33342/PI双染法特异性高，简单易行；TUNEL法灵敏度高，能检测少量的细胞凋亡，但成本较高，两种方法可结合使用以便更加准确的检测神经细胞的凋亡。

目的： 探讨血浆中载脂蛋白AⅠ(apoAⅠ)含量和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)活性在维吾尔族妇女宫颈病变进程中的动态变化及评价其对于宫颈癌预警的灵敏度、特异性和准确性。方法：收集新疆地区维吾尔族宫颈病变血浆样本共82例(宫颈炎22例，CINⅡ~Ⅲ20例，宫颈癌早期20例，宫颈癌晚期20例)，用酶联免疫法检测血浆中apoAⅠ蛋白含量和mTOR活性，分析其与宫颈病变进程的关系及相关性，评价其对于宫颈癌预警的灵敏度、特异性和准确性。结果：随着宫颈炎到CINⅡ~Ⅲ、宫颈癌早期和晚期发病过程，血浆apoAⅠ含量明显降低而mTOR活性上升，与正常对照宫颈炎组比较，其差异均有统计学意义(P＜0.05)；apoAⅠ的表达与mTOR活性呈低度负相关(r＜0.4，P＜0.05)；血浆mTOR活性的预警灵敏度、特异度和准确度较高，分别为94.0%、60.0%、80.0%，而apoAⅠ分别为70.1%、60.0%、29.0%。从不同指标联合检测的角度分析，apoAⅠ和mTOR联合检测的灵敏度、特异度和准确度分别为82.1%、60.0%、54.5%。结论：维吾尔族妇女宫颈癌发生发展与血浆中apoAⅠ含量和mTOR活性动态变化密切相关，可以成为宫颈癌早期诊断的预警或疗效评估的重要指标。

目的： 检测Survivin、NF-κB、STAT3 mRNA在40例子宫颈癌组织及30例正常子宫颈组织中的表达，分析它们与患者临床病理指标的相关性，初步探讨它们在子宫颈癌发生发展中的相互关系及作用机制。方法：经Trizol一步法提取40例子宫颈癌组织及30例正常子宫颈组织标本的总RNA，逆转录成cDNA，反转录RT-PCR法检测子宫颈癌组织及正常子宫颈组织中Survivin、NF-κB、STAT3 mRNA表达，分析Survivin、NF-κB、STAT3 mRNA表达及与临床病理指标之间的相关性。结果：子宫颈癌组织中Survivin、NF-κB、STAT3 mRNA表达水平显著高于正常子宫颈组织(P<0.05)。Ⅱb～Ⅲ a期子宫颈癌组织中三者mRNA的表达显著高于Ⅰ～Ⅱa期(P<0.01)；子宫颈癌患者中有淋巴结转移者Survivin mRNA的表达明显高于无淋巴结转移者(P<0.01)。且STAT3表达与Survivin表达相关(r=0.483，P<0.05)；Survivin表达与NF-κB表达相关(r=0.377， P<0.05)。结论：Survivin、NF-κB、STAT3 mRNA在子宫颈癌组织中表达上调，共同参与子宫颈癌的发生发展。

目的：研究联合检测食管鳞癌组织中Fascin与EGFR蛋白表达对食管鳞癌患者预后判断的价值。方法：取189例食管鳞癌蜡块组织标本制作组织芯片。采用免疫组织化学的方法，检测Fascin与EGFR蛋白的表达情况，采用SPSS 13.0软件分析其与临床病理指标及患者生存期的关系。结果：免疫组织化学检测结果表明，Fascin与EGFR蛋白在食管鳞癌组织中的高表达率分别为35.4%和56.1%，二者均高表达率为29.5%。临床指标相关性分析结果表明，癌细胞局部淋巴结转移者和未转移者的食管鳞癌组织EGFR蛋白阳性表达率分别为68.7%和49.6%，EGFR蛋白的表达与局部淋巴结转移显著相关(P=0.014)。Kaplan-Meier生存分析结果显示，Fascin或EGFR蛋白高表达的食管鳞癌患者5年生存率较低，而Fascin和EGFR蛋白二者均高表达的食管鳞癌患者5年生存率更低；相关性分析结果表明，在食管鳞癌组织中，Fascin与EGFR蛋白表达之间存在着显著的正相关关系(r =0.208，P=0.004)。多因素Cox回归分析结果表明，作为独立因子预警食管鳞癌患者预后不良，Fascin与EGFR联合检测的风险度为1.987，与Fascin的风险度1.852相比，未见明显升高。ROC曲线分析结果表明，与单独检测比较，联合检测Fascin和EGFR蛋白对判断食管鳞癌患者5年生存率的特异性明显升高。结论：食管鳞癌组织中Fascin与EGFR蛋白均高表达可能预示食管癌患者预后不良。

目的： 建立Ames波动试验的标准化方法，为其应用于化合物的遗传毒性检测奠定基础。方法：应用4种已知具有遗传毒性的阳性化合物敌克松(Dexon)、叠氮钠(SA)、环磷酰胺(CP)和2-氨基芴(2-AF)进行Ames波动试验。比较2种不同的增菌方法和2种指示剂，建立Ames波动试验的方法。Dexon采用0.1、1和10 μg/mL，SA采用0.01、0.1、1 μg/mL在非活化条件下与相应的溶剂对照进行试验；CP采用10、100、1 000 μg/mL，2-AF采用0.1、1和10 μg/mL在活化条件下与相应的溶剂对照进行试验；观察记录阳性孔数，根据情况调整阳性化合物的剂量，直到经统计分析后阳性孔数与溶剂对照组相比，差异有统计学意义(P<0.01)。确定各阳性化合物的剂量后，在相同剂量下重复试验3次，保证试验系统稳定可靠。结果：确定了Ames波动试验4种阳性化合物的剂量。在不加S9代谢活化系统的条件下，Dexon 3 μg/mL和SA 0.05 μg/mL，3块平行96孔板与溶剂对照组相比差异均有统计学意义(P<0.01)，对TA100呈现出强致突变作用；在加入S9代谢活化系统的条件下，CP 100 μg/mL和2-AF 30 μg/mL，3块平行96孔板与溶剂对照组相比差异均有统计学意义(P<0.01)，对TA100也呈现出强致突变作用。同时，在实验过程中改进了试验方法：包括对受试物剂量的标准化，改进了增菌培养的方法，并确定了指示剂。结论：建立了Ames波动试验方法，对已知阳性化合物测定结果的稳定性良好，并在研究中优化了实验条件。

目的： 建立稳定的hsa-miR-148a-3p低表达人支气管上皮细胞株(16HBE)。方法：根据miRBase中提供的序列信息设计hsa-miR-148a-3p tough decoy RNA(TuD RNA)，并将其连接到慢病毒载体pLKO.1-puro上。将重组慢病毒载体转染至293FT细胞并包装为慢病毒后，收集病毒上清，感染正常16HBE细胞。用嘌呤霉素筛选出has-miR-148a-3p低表达的16HBE细胞株，通过荧光定量PCR对其进行鉴定，然后对筛选出的细胞分别采用荧光定量PCR和Western blot检测DNA甲基转移酶1(DNMT1) mRNA和蛋白的表达水平。结果：测序结果表明含hsa-miR-148a-3p TuD RNA的重组慢病毒载体构建成功；荧光定量PCR检测显示has-miR-148a-3p低表达的16HBE细胞株has-miR-148a-3p的表达量比正常16HBE细胞低44%(P<0.01)，其作用靶基因DNMT1的mRNA和蛋白表达水平分别为正常细胞的3.4倍和2.0倍(P均<0.01)。结论：成功建立hsa-miR-148a-3p低表达的16HBE细胞，hsa-miR-148a-3p的低表达能提高DNMT1 mRNA和蛋白的表达水平。

目的： 构建慢病毒介导的人孕烷X受体(hPXR)sh-RNA干扰载体及筛选肝癌细胞稳定干扰株。方法：针对hPXR的特异性序列，设计干扰序列，构建重组克隆。转染HEK293T细胞，筛选有效干扰片段。HEK293T包装干扰病毒并转染肝癌HepG2细胞株，200 mmol/L嘌呤霉素筛选2－3周，Western blot检测PXR表达。hPXR激动剂利福平处理PXR sh-RNA稳定干扰肝癌HepG2细胞株和Scramble对照细胞，抽提RNA并鉴定hPXR靶基因细胞色素P450 3A4(CYP3A4)的表达。结果：筛选出了PXR有效干扰片段，并获得了PXR信号通路有效敲低的HepG2慢病毒稳定干扰株。结论：成功构建了慢病毒介导的PXR sh-RNA稳定干扰HepG2细胞株。

目的：建立可筛选化学诱变物的RNR3调控重组Lac Z 基因酵母细胞。方法：利用降式PCR技术从酵母基因组中扩增RNR3 启动子，将其插入到pMP206/ERE酵母报告载体，构建成RNR3调控的Lac Z酵母报告载体，将该载体转入W303-1A酵母细胞，构建成RNR3调控的重组Lac Z 基因酵母细胞。用数种化学诱变原作用于该重组基因酵母细胞，观察其对RNR3的诱导表达。结果：放线菌素D、丝裂霉素C、阿非迪霉素和溴乙锭不能诱导RNR3的表达，而甲磺酸甲脂、瘤可宁、顺铂、4-硝基-N-氧化喹啉、博来霉素、福莱霉素、5-氟尿嘧啶、喜树碱和羟基脲诱变原与RNR3表达有明显的剂量效应关系。结论：该重组酵母可用于对多种化学诱变原的快速筛选。

目的： 制备抗肝脏型脂肪酸结合蛋白(LFABP)的单克隆抗体(mAb)并进行亚型和特异性鉴定。方法：以重组的LFABP蛋白为免疫原，经过原核表达和纯化后，免疫BALB/c小鼠，获得分泌鼠抗人LFABP蛋白mAb的杂交瘤细胞株，通过ELISA 和Western blot方法检测其特异性。结果：纯化的LFABP重组蛋白免疫小鼠后经过筛选得到2株稳定分泌抗人LFABP的mAb杂交瘤细胞株，分别命名为3E6和5B7，其亚型分别为IgG1和IgG2a，抗体经纯化后浓度达到2 mg/mL，效价达到1∶10 000以上。Western blot分析结果表明可与细胞中表达的内源LFABP发生特异性免疫反应。结论：成功制备了鼠抗人LFABP的mAb，为进一步研究LFABP的生物学特性，并为相关疾病的治疗奠定了基础。

目的：研究藏茵陈总萜酮的致突变及抗突变作用。方法：致突变实验采用Ames实验及小鼠体内微核实验。Ames实验采用常规掺入法；微核实验采用连续灌胃给药10 d的骨髓嗜多染红细胞微核计数法。抗突变实验采用体内、体外两种方法，体外法选用TA100及TA102菌株与环磷酰胺(每皿200 μg)和丝裂霉素C(每皿2 μg)共孵育30 min后，分别给予藏茵陈总萜酮每皿156、312、625、1 250及2 500 μg，检测其对阳性剂诱发的已突变菌落的保护作用；体内实验采用藏茵陈总萜酮25、50及100 mg/kg小鼠连续灌胃给药10 d后，给予40 mg/kg环磷酰胺或2 mg/kg丝裂霉素C，计算微核率，检测其对未发生突变的骨髓细胞的保护作用。结果：致突变实验中，藏茵陈总萜酮在每皿< 2 500 μg剂量下，未诱发Ames实验各菌株回变菌落数增加；在每皿< 40 mg/kg剂量下，未诱发骨髓嗜多染红细胞微核率增高。抗突变实验中，藏茵陈总萜酮在每皿625~ 2 500 μg范围内，可使阳性致突变剂环磷酰胺和丝裂霉素C所诱发的高回变菌落数出现明显降低；藏茵陈总萜酮在50~ 100 mg/kg剂量范围，可使阳性剂环磷酰胺或丝裂霉素C所诱发的高微核率出现明显降低。结论：本实验条件下，藏茵陈总萜酮未表现出诱导基因突变和染色体畸变作用，且有显著的抗突变作用。

目的：检测红丝线草的致畸性。方法：红丝线草提取液设10.0、5.0、2.5 g/kg 3个剂量组，同时以去离子水作阴性对照，阿司匹林(0.3 g/kg)作阳性对照。每组12只SD孕鼠，受孕6 d开始按10 mL/kg给孕鼠灌胃受试溶液，每天1次，至受孕15 d，共灌胃10次。于妊娠 20 d解剖孕鼠，检查胎鼠的身体、外观、内脏及骨骼发育等指标。结果：红丝线草各剂量组的孕鼠体质量、窝质量、胎鼠体质量、身长、尾长、活胎率、吸收胎率及死胎率与阴性对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)，未见胎鼠外观、内脏和骨骼发育异常及畸形。结论：在本实验条件下，红丝线草对大鼠无母体毒性、胚胎毒性和致畸性。

目的：研究经环氧乙烷灭菌的培养皿对Ames试验的影响。方法：采用Ames试验平板掺入法，分别使用不同储存时间及是否通风等情况下的环氧乙烷灭菌培养皿，计数TA97、TA98、TA100、TA102及TA1535菌株的回变菌落数。结果：灭菌后存放1个月左右(25 d)的培养皿中环氧乙烷的残留在活化和非活化两种条件下均能引起TA100和TA1535菌株的回变菌落数增多(TA100，约自发回变数的1.5倍；TA1535，约自发回变数的10倍)，而经通风或延长培养皿储存时间可减少环氧乙烷残留并消除这种致突变作用。结论：在一定条件下，经环氧乙烷灭菌的培养皿对Ames试验中TA100、TA1535菌株有致突变性。

肿瘤的发生和发展是一个复杂的多因素多机制的过程，研究其易感基因的多态性对于阐明疾病易感性机制、设计个体化治疗方案和环境危险因素的评价与预警等均具有重要意义。Toll样受体既可以活化和促进肿瘤细胞的增殖和生长，也可以通过募集炎性细胞或激活免疫反应来抑制和杀灭肿瘤细胞，可调控肿瘤的发生、发展和周围细胞的免疫反应。Toll样受体基因的多态性使其编码的蛋白或传导的信号发生改变，从而使人群出现对某些肿瘤不同的遗传易感性，其基因特定位点的变异可影响肿瘤的发生和发展。本文就近年来有关Toll样受体基因多态性与肿瘤易感性的相关研究作一概述。

芳香烃受体(AHR)不仅介导二恶英、多环芳烃及多氯联苯等环境有机污染物的致癌/促癌作用，在正常生理条件下，它也常过表达并结构性活化于人或动物多种恶性肿瘤中，能抑制关键抑癌基因的表达与功能，促使干细胞转化，与雌激素受体相互作用，并干扰细胞周期、凋亡、接触性抑制、胞外基质代谢、细胞-基质相互作用、血管生成及炎症等生理或病理过程，促进癌症的发生、发展及转移，是人体或动物潜在的致癌基因。本文重点介绍AHR在肿瘤发生、发展及转移等病理过程中的作用和机制研究的新进展。

多壁碳纳米管(MWCNT)是目前最常用的纳米材料之一。MWCNT具有大比表面积、高纵横比和管状结构的特点，与生物体内许多重要的大分子如DNA、蛋白质等具有高度亲和力，可以在体内多个器官间游走且不易降解排出。目前MWCNT在医学人工材料、疾病诊断甚至肿瘤治疗等方面得到广泛使用，但是其长期大规模使用是否会对机体造成毒性损伤甚至导致癌症发生尚无定论。本文就MWCNT的致癌性研究进展作一综述，为进一步阐明MWCNT的毒性损伤及其机制提供线索。