目的： 构建C-末端结合蛋白-1(CtBP1)基因RNA干扰(RNAi)的真核表达载体，转染人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR＋/＋)，初步鉴定其干扰效果。 方法： 以人CtBP1基因为靶基因，以pGenesil-1质粒为载体，根据GenBank数据库提供的CtBP1基因核苷酸序列，选择设计两条siRNA干扰序列，将带9个碱基茎环结构的干扰序列插入带有绿色荧光蛋白(EGFP)基因、卡那霉素(Kanr)抗性基因及U6启动子的真核表达载体pGenesil-1中，构建针对CtBP1基因的shRNA真核表达载体，转化大肠杆菌DH5α菌株，提取质粒，进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析。确认载体构建成功后，用脂质体LipofectamineTM 2000将重组质粒瞬时转染人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR＋/＋)，在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达，计数转染细胞数，计算转染效率，RT-PCR法检测载体对CtBP1基因的表达抑制效果。 结果： 构建针对CtBP1基因的pGenesil-1-CtBP1小发夹RNA(pGenesil-1-CtBP1-shRNA)，经限制性内切酶酶切、PCR和 DNA测序证实与设计完全一致；在荧光显微镜下观察到B-MD-C1(ADR＋/＋)细胞表达绿色荧光蛋白(EGFP)，证实重组质粒己转染入细胞，转染效率达到60％～70％；RT-PCR结果显示B-MD-C1(ADR＋/＋)细胞中CtBP1基因被特异抑制，基因表达抑制率达40％以上，与转染试剂对照组、空白对照组和阴性序列对照组间的差异均具有统计学意义(P均<0.05)。 结论： 成功构建CtBP1基因的shRNA表达载体，可以有效抑制B-MD-C1(ADR＋/＋)细胞上CtBP1基因表达。为进一步研究CtBP1基因功能进而逆转肿瘤的多药耐药奠定基础。

目的: 研究miRNA模拟物浓度、脂质体浓度、转染时间对人支气管上皮细胞转染效果和毒性的影响，筛选miRNA模拟物转染人支气管上皮细胞的最适宜条件。 方法： 分别应用0、10、30、50 nmol/L化学合成的、经Cy3标记的miRNA模拟物，以0、0.1％、0.3％、0.5％浓度的脂质体转染剂转染人支气管上皮细胞，转染6、12、24 h后应用荧光显微镜观察细胞转染情况，计算荧光强度，评价转染效果；转染24 h后，应用WST-8法检测不同转染条件对细胞活性的影响。 结果： 随着miRNA模拟物、脂质体浓度增加和转染时间的延长，细胞内荧光信号增强。30和50 nmol/L miRNA模拟物的转染效率明显高于10 nmol/L组(P<0.05)；0.3％和0.5％ 脂质体组的转染效率明显高于0.1％组(P<0.05)；转染24 h的荧光强度明显高于转染12 h和6 h组(P<0.05)。与对照组相比，转染24 h后各转染组细胞活性无显著性变化(P>0.05)。 结论： 人支气管上皮细胞适合应用脂质体进行化学合成miRNA模拟物的转染研究，miRNA模拟物浓度、脂质体浓度、转染时间均是转染的重要影响因素，30 nmol/L miRNA模拟物、0.3％脂质体、转染24 h可获得理想的转染效果，转染后对细胞活性无影响。

目的： 利用报告基因监测肝干细胞向胰腺细胞的转分化潜能。 方法： 通过PCR从大鼠鼠尾基因组中克隆胰岛素启动子片段，构建大鼠胰岛素Ⅰ启动子调控的红色荧光蛋白报告载体(pRIP Ds Red)，并利用报告载体标记的肝原始细胞系(liver epithelial progenitor cells, LEPCs)及经逆转录病毒感染后表达MafA的肝原始细胞系(LEPCs-MafA)，观察肝干细胞向胰腺细胞的转分化潜能。 结果： 获得胰岛素启动子调控的报告载体、报告载体标记的LEPCs及LEPCs-MafA。 结论： pRIP DsRed报告载体的成功构建为研究LEPCs向胰腺细胞的转分化提供了简捷的分子工具。

目的： 用于负链RNA病毒的重组技术称为反向遗传技术，其核心需要构建一个具有双向启动子的反向遗传通用载体，可以分别正向转录翻译病毒复制所需酶系和负向转录病毒负链RNA。为此，构建负链RNA病毒反向遗传通用的载体。 方法： 为提高转染和表达效率，首先改造pcDNA3载体，通过酶切删除pcDNA3载体中非必需序列，在保留Amp抗性的前提下，通过酶切去除pcDNA3载体中非必需的Kan抗性表达盒与CMV启动子前区。利用长引物合成含有反向pol I启动子与多克隆位点的基因片段。将合成后的片段酶切、补平粘端、连接，反向插入至经改造后的pcDNA3载体中，构建反向遗传通用表达载体。采用PCR检测、酶切鉴定以及DNA测序进行验证。 结果： PCR检测、酶切鉴定以及DNA测序结果表明，载体构建正确，合成及插入序列与预期设计完全一致。 结论： 成功构建具有CMV与pol I双向启动子的反向遗传通用载体，为建立负链RNA病毒反向遗传平台提供了研究基础。

目的： 建立脂质体介导pcDNA3.1-IDO转染人肝癌细胞株hepG2细胞的转染方法。 方法： 在大肠杆菌中扩增pcDNA3.1-IDO质粒，通过lipofectamineTM2000转染试剂将pcDNA3.1-IDO转入人肝癌细胞hepG2，同时设置空质粒转染组(pcDNA3.1- hepG2细胞)和空白对照组(hepG2细胞)。分别应用RT-PCR和Western blot方法检测吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)基因及IDO蛋白在hepG2细胞中的表达。 结果： 经RT-PCR和Western blot检测证实空质粒转染组和空白对照组hepG2细胞无IDO基因及蛋白的表达，而重组质粒组的hepG2细胞均表达IDO基因和蛋白。 结论： 通过脂质体介导成功地将pcDNA3.1-IDO转染入肝癌细胞株hepG2细胞。这为研究IDO基因奠定了基础。

目的： 为了研究p53 codon 72多态的功能，采用定点诱变法构建人p53基因的多态质粒。 方法： 设计带有突变碱基的引物，通过PCR扩增引入突变碱基，再将突变后的p53序列插入载体中，经测序确定所扩增的DNA序列，并用体外转录翻译系统制备p53蛋白和iASPP蛋白，免疫沉淀法检测蛋白相互作用。 结果： 通过PCR获得的含突变碱基的p53序列经连接后插入真核表达载体pReceiver-M01中，构建了p53多态位点为72Arg的表达质粒pReceiver-M01-p53(Arg72)。测序证明序列正确，表达的p53蛋白能与iASPP相互作用，具有生物学功能。 结论： 成功构建了p53多态(72Arg)真核表达载体，为进一步深入研究p53多态的生物学功能奠定了基础。

目的： 研究维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate, VES)是否可通过氧化应激来诱导胃癌细胞凋亡及其可能机制。 方法： 分别用5、10和20 μg/ml的VES处理胃癌SGC-7901细胞24 h,同时设阴性对照组和甘露醇(活性氧抑制剂)预处理组。通过流式细胞技术、共聚焦技术和Western blot方法，检测了VES诱导SGC-7901细胞线粒体氧化损伤及细胞凋亡的情况,用相应的检测试剂盒检测细胞内活性氧和Ca2＋含量变化情况。 结果： 不同浓度的VES对SGC-7901细胞均有诱导凋亡的作用。表现为随VES浓度的增加，SGC-7901细胞凋亡数量呈现增加的趋势，且SGC-7901细胞内活性氧含量及钙离子水平呈现增加的趋势，而线粒体膜电位逐渐下降。活性氧抑制剂甘露醇(1 mmol/L)对VES诱导的胃癌细胞凋亡，和细胞内活性氧、钙浓度的增高及膜电位的降低均有显著抑制作用(P<0.05)。随VES浓度的增加，SGC-7901细胞内Bax蛋白的表达呈现上升的趋势，而Bcl-2蛋白的表达呈现下降趋势。甘露醇可显著降低胃癌SGC-7901细胞Bax蛋白的表达水平，同时增加Bcl-2蛋白的表达(P<0.05)。 结论： VES可显著促进胃癌细胞凋亡，并且随着VES剂量的增加，VES诱导胃癌细胞凋亡的作用越强。细胞内活性氧含量增加、细胞内钙超载所导致的线粒体氧化损伤作用可能是VES诱导细胞凋亡的机制之一。

目的： 探讨不同浓度氯化镉(CdCl2)对NRK细胞内蛋白激酶Cα(PKCα)mRNA及其蛋白质表达的影响，以及PKC抑制剂Bisindolymaleimide I (Bis I)对镉染毒NRK细胞PKCα mRNA及蛋白质表达的生物学作用。 方法： 应用实时荧光定量PCR技术检测不同浓度( 0、1.25、2.50、5.00、10.00 μmol/L) CdCl2对NRK肾细胞处理6 h与12 h后PKCα mRNA表达的影响，同时用Western blot技术检测CdCl2对NRK肾细胞内PKCα蛋白质表达的影响。用PKC抑制剂Bis I预处理细胞后，用不同浓度CdCl2(0、2.50、5.00 μmol/L)进行染毒，再检测PKCα mRNA及蛋白质的表达变化。 结果： CdCl2浓度在1.25～10.00 μmol/L范围内，可引起NRK肾细胞内PKCα mRNA及蛋白质表达水平升高，并呈时间-剂量-效应关系；PKC抑制剂Bis I能明显抑制镉引起的PKCα mRNA及蛋白质的表达。 结论： CdCl2可以诱导NRK肾细胞内PKCαmRNA及蛋白质表达，PKC抑制剂Bis I具有一定程度抑制CdCl2对PKCα的诱作用，因此在抑制CdCl2对生物机体的伤害作用方面具有生物学意义。

目的： 研究围生期双酚A(Bisphenol A，BPA)暴露对SD大鼠子代生殖系统的影响及雌激素受体(Estrogen Receptor，ER)表达的改变。 方法： 经灌胃给予围生期孕鼠0、5、50、500 mg/(kg•d)的BPA，观察雌性子代生殖器官重量、病理学改变、子宫ERα、β及磷酸化ERK(p-ERK)与总ERK(T-ERK)蛋白表达的改变，并通过子宫增重实验检测子宫对雌二醇(E2)敏感性的改变。 结果： 500 mg/kg BPA可引发亲代中毒症状及子代体重下降(P<0.05)，50 mg/kg BPA可明显增加雌性子代体重及子宫重量，BPA各剂量组均可使子宫内膜增厚及相对比例增加，子宫增重和子宫相对增殖率增加，并提高ERα与p-ERK蛋白表达，而对ERβ无影响。 结论： BPA围生期暴露可引起子代子宫组织ER蛋白表达变化，并可提高子宫对E2的敏感性。

目的： 筛选三邻甲苯磷酸酯(tri-ortho-cresyl phosphate, TOCP)暴露鸡大脑总蛋白中的差异表达蛋白，为蛋白质谱分析提供依据。 方法： 成年罗曼鹤母鸡12只随机分成TOCP染毒组和对照组，染毒组按1 000 mg/kg经口1次给予TOCP,对照组给予生理盐水。染毒后24 d处死动物，冷环境下分离大脑，匀浆后高速离心提取总蛋白。通过双向凝胶电泳获得完整的全蛋白质图谱，运用图像分析软件(Image Master 2D)对银离子染色的电泳图谱进行分析。 结果： 在鸡大脑总蛋白中，对照组和染毒组分别检测到1 332和1 008个蛋白点，能相互匹配的占77.78％。与对照组比较，染毒组的蛋白表达谱中差异表达蛋白有262个，其中蛋白差异表达达到4倍以上的蛋白点数有43个。 结论： TOCP暴露可导致鸡大脑多种蛋白差异表达，其中一些蛋白的差异表达可能与TOCP诱发迟发性神经毒性有关。

目的: 探讨香加皮三萜类化合物(triterpenes compound of cortex periplocae,TCCP)对甲基苄基亚硝胺(N-nitrosomethyl- benzylamine, NMBA)诱导的食管癌大鼠CD4＋CD25＋调节性T细胞功能的影响。 方法： 健康雄性F344大鼠40只，随机分为模型组(0.5 mg/kg NMBA皮下注射)、治疗组(0.5 mg/kg NMBA皮下注射及10 mg/kg TCCP肌肉注射)、大豆油对照组(肌肉注射大豆油1 ml/kg)和正常对照组，每组10只。各组每周给受试物3次，连续5周。分别在给受试物后第9周和第15周抽取4组大鼠外周血各1 ml。用流式细胞仪检测大鼠外周血中CD4＋ T细胞和CD4＋CD25＋调节性T细胞(Tr细胞)的水平。另留取血清用ELISA法检测大鼠外周血白细胞介素IL-2、IL-10和转化生长因子TGF-β1的含量。 结果： 与正常对照组相比，NMBA给药后第9周和第15周，模型组外周血中CD4＋ T细胞比例均显著降低(P均<0.05)，而CD4＋ CD25＋ Tr细胞比例均显著升高(P均<0.05)。与同时期模型组比较，TCCP治疗组在给药后第9周和第15周外周血中CD4＋ T细胞比例升高，CD4＋ CD25＋ Tr细胞比例降低，差异均具有统计学意义(P均<0.05)。NMBA给药后第9周和第15周，模型组大鼠外周血中IL-10、TGF-β1水平显著高于正常对照组(P均<0.05)，经TCCP治疗后显著下降(P均<0.05);大鼠外周血中IL-2水平则呈现与之相反的趋势。 结论： NMBA诱导大鼠食管癌后外周血中CD4＋ CD25＋ Tr细胞水平增加，TCCP可以通过抑制CD4＋ CD25＋ Tr细胞活化来纠正食管癌发生、发展过程中所致免疫细胞抑制状态，改善NMBA诱导的食管癌大鼠细胞免疫功能紊乱。

目的： 比较携带BRCA1基因突变的乳腺癌患者与正常人成淋巴细胞株对胆碱(choline chloride,CC)与叶酸(folic acid,FA)缺乏诱发细胞凋亡的差异。 方法： 实验设置了6个CC(0～21.5 μmol/L)与4个FA(30～240 nmol/L)的24种不同浓度的组合，培养乳腺癌患者BRCA1基因突变的人成淋巴细胞株GM13705(病例组)和人成淋巴细胞株GM12593(正常对照组)， 9 d后，用胞质阻断微核细胞组分析(CBMN Cyt)，比较胆碱与叶酸不同浓度组合中两种细胞株的凋亡率。 结果： 当CCC≥6 μmol/L、 CFA≥120 nmol/L时，两细胞株的凋亡率均显著降低(P<0.01或P<0.05) 。在所有浓度组合中，病例组细胞株的凋亡率均比对照细胞株低，但消减背景值后，两细胞株的凋亡率差异均无统计学意义(P>0.05)。 结论： 乳腺癌患者人成淋巴细胞株对胆碱和叶酸的凋亡效应无特殊敏感性。

目的： 研究雌激素受体(estrogen receptor alpha， ESR1)在新疆地区甲状腺癌组织中的表达，探讨其在临床中的意义。 方法： 用免疫组织化学SP法检测64 例甲状腺癌、21例甲状腺良性腺瘤、13例桥本氏甲状腺炎、6例结节性甲状腺肿和6例癌旁正常组织中ESR1基因表达，结合临床病理因素进行分析。 结果： ESR1在甲状腺癌组织中的阳性表达显著高于甲状腺腺瘤、桥本氏甲状腺炎、结节性甲状腺肿和癌旁正常组织(P<0.01)；甲状腺癌组织学类型、临床分期、淋巴结转移及预后与ESR1蛋白表达相关(P均<0.05)。 结论： ESR1可能在甲状腺癌的发生、发展过程中起到了重要作用，故阻断其作用环节可能为治疗甲状腺癌提供新策略。

目的： 研究信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3，STAT3)、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)基因在哈萨克族食管癌中的表达及相关性，从而为探讨哈萨克族食管肿瘤癌变的机制奠定基础。 方法： 采用RT-PCR方法检测STAT3、VEGF基因在30例哈萨克族食管癌组织及相应癌旁组织(手术切缘无癌组织)中的表达。 结果： STAT3、VEGF基因在30例食管癌组织中表达的阳性率分别为73.33％(22/30)和76.67％(23/30)，30例癌旁组织中表达的阳性率为43.33％(13/30)，两种基因在癌组织中表达的阳性率均高于癌旁组织(P<0.05)。STAT3与VEGF基因的表达具有相关性(P<0.05)。结论： STAT3、VEGF基因的表达可能与哈萨克族食管癌的发生有关，两者之间可能具有协同作用，共同促进食管癌的发生。

目的： 研究NJY冻干粉对机体体能的影响及其免疫调节作用和抗肿瘤作用。 方法： 分别按NJY冻干粉16、32、64 mg/kg剂量给ICR种小鼠灌胃给药，进行负重游泳实验、耐缺氧实验、迟发超敏反应实验和巨噬细胞吞噬功能实验，观察NJY冻干粉对小鼠生理机能及免疫功能的影响。用NJY冻干粉给S180荷瘤昆明小鼠灌胃，观察对肉瘤生长的影响。另用NJY冻干粉给S180荷瘤昆明小鼠灌胃，并给小鼠腹腔一次性注射环磷酰胺，观察NJY冻干粉对环磷酰胺化疗作用的影响，以及NJY冻干粉对移植性S180腹水瘤小鼠存活时间的影响。 结果： NJY冻干粉16 mg/kg和64 mg/kg组小鼠抗疲劳能力较对照组明显提高(P<0.05)； 32 mg/kg和64 mg/kg组小鼠耐缺氧能力较对照组明显提高(P<0.05)；NJY冻干粉32 mg/kg和64 mg/kg组小鼠耳肿胀率较对照组明显增加(P<0.05)；NJY冻干粉给药组巨噬细胞吞噬指数与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。NJY冻干粉给药组小鼠S180型肉瘤抑瘤率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)；NJY冻干粉给药组腹水瘤小鼠生命延长率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)；环磷酰胺60mg/kg与NJY冻干粉合用后，抑瘤率较环磷酰胺对照组显著提高(P<0.05)。 结论： NJY冻干粉具有免疫增强作用, 可以提高小鼠的抗疲劳能力和耐缺氧能力, 能增强环磷酰胺的抗肿瘤作用。

目的： 观察五味子水浸提液对SD大鼠胚胎和胎仔的发育毒性。 方法： 采用SD孕鼠40只，分为溶剂对照组、五味子组，每组各20只。五味子组大鼠于妊娠第6天至妊娠第17天，经口灌胃给予五味子水浸提液(按每千克大鼠体质量15 g生药)，每天1次；溶剂对照组孕鼠则给予等体积饮用水灌胃。实验过程中观察动物的体征变化，于妊娠第20天处死孕鼠并摘取卵巢和子宫，观察黄体数、着床数、胚胎生存及死亡情况、生存胎仔的外观、性别、体重、骨骼及脏器的发育等指标。结果： 孕鼠及胚胎、胎仔发育的上述各观察指标未见明显异常，与对照组比较差异无统计学意义。 结论： 在本实验条件下，五味子水浸提液未见明显的母体毒性与胚胎和胎儿发育毒性。

目的： 应用均匀设计法，定量分析海滩牵牛中东莨菪亭和橙皮素联用对冰醋酸所致小鼠扭体实验的镇痛效果。 方法： 设置 5 个水平的东莨菪亭(S)和橙皮素(H)联用比例和剂量，采用冰醋酸致小鼠扭体模型,观察不同组合的镇痛效果，综合数理分析结果, 确定最优配方。 结果： 联合使用橙皮素194.5 mg/ kg和东莨菪亭15.36 mg/ kg 对冰醋酸所致小鼠扭体实验可达到最佳的抑制作用。最佳剂量范围， H：175～215 mg/kg；S:14～17 mg/kg。 结论： 本实验采用均匀设计法确定了海滩牵牛中东莨菪亭和橙皮素联用对冰醋酸所致小鼠扭体实验的镇痛效果的最佳配比。均匀设计法可用于多药物联用的定量分析,但有一定的局限, 其结果需经实验确证。

量子点因其具有良好的光学特性以及其表面功能化包覆材料的可修饰性，目前成为生物医学领域最具有应用前景的荧光标记物，由于功能化量子点的核心成分及其表面包覆材料均存在不同程度生物毒性，成为量子点在生物体内应用中的一个瓶颈问题。本文对功能化量子点的体内、体外毒理学研究进展进行综述。

塑料材质(如塑料瓶和塑料袋等)已经全面进入人们的日常生活，而国内外对于塑料材质的健康效应均缺乏相应的认识。本文就几种常见塑料材质(聚乙烯对苯二甲酸酯、聚乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯、聚苯乙烯和聚碳酸酯)近年来的安全研究进展作一评述，包括其温度耐受性、添加剂及存在的健康隐患，尤其是有争议性的双酚A和增塑剂酞酸酯等的健康效应。

人类细胞色素P450(CYP450)在多种内源性及外源性物质的生物代谢中起重要作用。大多数CYP450存在基因多态性，其中CYP1A1、CYP2E1两个基因多态性与癌症的发生密切相关。本文综述了近年来人类细胞色素P4501A1(CYP1A1)和P4502E1(CYP2E1)与癌症易感性之间关系的研究进展。

Krüppel-like factor 4 (KLF4)是一个在多种组织中广泛表达的锌指结构转录因子，作为KLF因子家族的一员，KLF4在细胞分化和细胞周期停滞中扮演重要角色。根据靶基因不同，KLF4既可以激活又可以抑制转录作用。此外，在特定的细胞微环境情况下，KLF4既可以作为肿瘤抑制因子也可以作为癌基因。对于KLF4因子不同功能间的转换，在正常细胞以及癌细胞中的作用及其相应的分子机制研究，将进一步为肿瘤的发生和治疗的研究提供新的策略和思路。